【摘 要】
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目的:为了探究巨噬细胞对梅毒螺旋体（Treponema pallidum subsp.pallidum,Tp）的吞噬作用,Tp刺激巨噬细胞后对细胞结构的影响。探讨M1/M2型巨噬细胞转换在梅毒免疫中的作用。方法:Tp Nichol株在新西兰白兔的睾丸中增殖,获取数量多、纯度高且活性好的Tp。Tp与THP-1来源的巨噬细胞共培养后,通过激光共聚焦显微镜观察梅毒螺旋体黏附和被巨噬细胞吞噬的作用。透射电
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目的:为了探究巨噬细胞对梅毒螺旋体（Treponema pallidum subsp.pallidum,Tp）的吞噬作用,Tp刺激巨噬细胞后对细胞结构的影响。探讨M1/M2型巨噬细胞转换在梅毒免疫中的作用。方法:Tp Nichol株在新西兰白兔的睾丸中增殖,获取数量多、纯度高且活性好的Tp。Tp与THP-1来源的巨噬细胞共培养后,通过激光共聚焦显微镜观察梅毒螺旋体黏附和被巨噬细胞吞噬的作用。透射电镜观察巨噬细胞吞噬Tp后巨噬细胞内部结构的变化。梅毒螺旋体与THP-1来源的巨噬细胞共培养12小时,更换新鲜培养基后再继续培养24小时、48小时、72小时及6天,通过免疫荧光及蛋白印迹法,检测不同时间段巨噬细胞内,M1型标记CD86以及M2型标记CD163。另外采用了 ELISA,检测 了六种 M1 型细胞因子 IL12 p70,、IFN-γ、CXCL10、IL-6、TNF-α、IL-1 β 以及一种M2型细胞因子TGF-β 1的表达。采用Dunnett-t检验进行组间数据比较。结果:1.兔感染模型的构建,成功获得大量纯度高、活性较好的Tp用于下游实验。2.免疫荧光观察到,Tp被巨噬细胞吞噬进入细胞内,并且影响巨噬细胞骨架蛋白F-肌动蛋白的分布,细胞伸出伪足,呈长梭形或多角形。3.透射投射电镜下观察到,Tp可黏附在巨噬细胞表面,巨噬细胞伸出伪足将Tp吞噬进细胞内。细胞内可观察到点状或圆柱状的螺旋体片段,Tp片段周围高尔基体肥大明显,并形成吞噬小泡。巨噬细胞内内质网肿胀和不规则增生明显,线粒体体积增大。4.梅毒螺旋体刺激巨噬细胞12h后,再继续培养24h、48h、72h及6d后,免疫荧光、WB观察到,Tp刺激后的巨噬细胞高表达的M1标志物CD86,而低表达M2标志物 CD163。5.梅毒螺旋体刺激巨噬细胞12h后,再继续培养24h、48h、72h及6d后,收集细胞上清。Tp刺激组在不同时间段内,细胞上清中M1型炎症因子IL12 p70,、IFN-γ、CXCL10、IL-6、TNF-α、IL-1 β 明显升高（P<0.001）。而 M2 型炎症因子 TGF-β1与PBS组相比无明显区别（P>0.05）。结论:1.巨噬细胞伸出伪足将Tp以内吞方式吞进细胞内,将Tp裂解成片段。Tp刺激巨噬细胞后内质网、线粒体正常结构改变,提示Tp可能通过刺激巨噬细胞内质网应激与线粒体应激,诱导炎症反应。2.梅毒螺旋体可诱导M0型巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞,且在6天内不发生M1/M2型巨噬细胞再转化。
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