安徽省部分地区鹿肠道寄生虫流行病学调查

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近年我国养殖业飞速发展,随着生活水平提高,特种经济动物、药用动物的养殖愈发受到重视,尤其是养鹿业更是受到了广泛开发应用,由小规模逐步发展壮大。在阻碍养鹿业发展的各个因素中,寄生虫病占了很大的比重,而肠道寄生虫病更是鹿寄生虫病的研究重点。鹿类感染肠道寄生虫病不仅机体健康、生产性能会受到影响,鹿相关的产品的质量也不能幸免,比如皮毛的美观度、鹿茸的生长速度和药效等,严重时还会导致鹿死亡,这些危害在幼龄鹿身上体现得更为严重。同时,从经济和公共卫生意义方面考虑,由于鹿类可感染许多人畜共患寄生虫,人和鹿及其产品的接触机会愈高,潜在的感染风险也相应提升,所以研究鹿寄生虫病已经有较迫切的现实需求。本试验对安徽省多地人工饲养梅花鹿进行肠道寄生虫大体调查的基础上,对鹿肠道隐孢子虫、芽囊原虫、毕氏肠微孢子虫、人五毛滴虫、贾第虫、艾美耳球虫、内阿米巴原虫等进行分子流行病学调查,以了解安徽省鹿群中上述寄生虫的虫种/基因型分布情况,为我省鹿肠道寄生虫病的防治及人兽共患病的控制提供参考。2019年4月~10月,从安徽省滁州市凤阳县、蚌埠市怀远县、宣城市宁国市、淮南市凤台县和黄山市徽州县等地的5家梅花鹿场共采集336份新鲜粪便样品,采用饱和盐水漂浮法、水洗沉淀法等常规检测方法对上述样品进行检测。结果显示安徽省鹿肠道寄生虫感染率为25%(84/336),检出球虫、鞭虫、毛圆线虫、前后盘吸虫、莫尼茨绦虫和内阿米巴原虫等虫种,感染率分别为3.87%(13/336),0.89%(3/336),7.44%(25/336),5.06%(17/336),5.65%(19/336)和 2.08%(7/336),其中毛圆线虫、前后盘吸虫和莫尼茨绦虫等为本次调查的优势虫种。为了解安徽省鹿Cryptosporidiun sp.流行情况,本研究从上述5个鹿场采集鹿粪便样品336份,提取所有样本粪便基因组DNA,用基于隐孢子虫18S rDNA基因的巢式PCR方法对所有样品进行检测,确定Cryptosporidiun sp.感染率,并对所得阳性样品的PCR产物进行测序和分析。结果显示,安徽省鹿Cryptosporidiun sp.感染率为2.38%(8/336),其中滁州感染率为3.73%(5/134),蚌埠感染率为4.17%(1/24),黄山感染率为1.67%(2/120),宣城和淮南未检出Cryptosporidiun sp.。序列分析表明本次调查所获得的8个Cryptosporidiun sp.分离物为Crptosporidium deer genotype(n=7)和C.parvum(n=1)。为了解安徽省鹿Blastocystis sp流行和基因型分布情况,对上述提取的所有基因组DNA进行基于Blastocystis sp 18s rDNA基因的单步PCR扩增。结果显示,安徽省鹿Blastocystis sp感染率为8.63%(29/336),其中滁州感染率为21.64%(29/134),蚌埠、宣城、淮南、黄山未检出Blastocystis sp。18s rDNA基因分析表明本次调查共获得2种已知基因型ST10(27)和ST4(2),其中ST10存在两个已知的等位基因(Allele 43和Allele 152)及一个no match的等位基因,ST4有一个no match的等位基因。为了解安徽省鹿E.bieneusi的流行情况,对上述所提基因组DNA用基于E.bieneusi ITS基因的巢式PCR方法检测。结果显示,安徽省鹿E.bieneusi感染率为10.42%(35/336),滁州感染率为 25.37%(34/134)、宣城感染率为 27.8%(1/50),蚌埠、淮南和黄山未发现阳性。共检出5个已知的E.bieheusi基因型,包括BEB6(20)、Peru6(10)、HLJD-V(3)、COS-Ⅰ(1),COS-Ⅱ(1)。其中,除基因型 Peru6属于Group 1外,其他基因型均属Group 2。为调查安徽省鹿P.hominis流行情况,对上述所提基因组DNA进行基于P.hominis 18S rDNA基因的PCR扩增。结果显示,安徽省鹿P.hominis感染率为7.14%(24/336),蚌埠、黄山未检出P.hominis,其余地区感染率分别为滁州12.69%(17/134),宣城11.11%(4/36),黄山2.5%(3/120)。序列分析显示所得24个阳性样品均为P.hominis。为了解安徽省鹿艾美耳球虫流行情况,对上述所提所有基因组DNA进行基于艾美尔球虫ITS-1基因的PCR扩增。结果显示,本次调查发现安徽省鹿艾美耳球虫感染率为8.93%(30/336),其中滁州感染率为14.93%(20/134),蚌埠感染率为8.33%(2/24),宣城感染率为8.00%(4/50),淮南感染率为4.55%(1/22),黄山感染率为2.50%(3/120)。序列分析显示本次调查共获得3种艾美耳球虫,即E.sordida(14),E.Parva(5)和 Ecrandallis(2)。为了解安徽省鹿E.bovis流行情况,对上述所提所有基因组DNA进行基于E.bovis ITS-1基因的PCR扩增。结果显示,本次调查发现安徽省鹿E.bovis感染率为 31.55%(106/336),其中滁州感染率 63.43%(85/134),蚌埠感染率 16.67%(4/24),宣城感染率16.67%(6/36),淮南未发现阳性样本,黄山感染率9.17%(11/120)。对所获得的6个序列经Blast比对,各个序列有一定的变异,但均为E.bovis。为了解安徽省鹿G duodenalis感染情况,对上述提取的所有基因组DNA用基于G duodenalis SSU rDNA基因的巢式PCR方法检测。结果显示,本次调查未检出 G duodenalis。安徽省鹿肠道寄生虫总感染率为25%(84/336),安徽省鹿隐孢子虫总感染率为2.38%(8/336),Blastocystis sp.感染率为8.63%(12/336),E.bieheusi总感染率为10.42%(35/366),P.hominis感染率为7.14%(24/336),艾美耳球虫总感染率为8.93%(30/336),E.bovis感染率为31.55%(106/336),未发现G.duodenalis感染。其中隐孢子虫、毕氏肠微孢子虫、蓝氏贾第鞭毛虫是明确的人兽共患原虫,所以本研究有重要的公共卫生学意义。
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