【摘 要】
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本试验通过先前的研究从金黄色葡萄球菌培养基中分离提纯一株对金黄色葡萄球菌有抑制作用的菌株。并对该抑制菌株进行形态特征观察,采用生理生化试验和16SrDNA测序等技术进行分析鉴定。对比其细菌素与无细胞抗菌液的抗菌活性,然后对细菌素抑菌谱等特性进行研究。以小鼠为试验动物,对其进行灌胃,研究粗提枯草芽孢杆菌细菌素对灌胃小鼠生长性能、脏器指数、血液相关生化指标、粪便有益菌、血液中抗氧化性能等的影响。以家兔
【基金项目】
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横向:节能环保微生物饲料研制（项目编号:810021）；
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本试验通过先前的研究从金黄色葡萄球菌培养基中分离提纯一株对金黄色葡萄球菌有抑制作用的菌株。并对该抑制菌株进行形态特征观察,采用生理生化试验和16SrDNA测序等技术进行分析鉴定。对比其细菌素与无细胞抗菌液的抗菌活性,然后对细菌素抑菌谱等特性进行研究。以小鼠为试验动物,对其进行灌胃,研究粗提枯草芽孢杆菌细菌素对灌胃小鼠生长性能、脏器指数、血液相关生化指标、粪便有益菌、血液中抗氧化性能等的影响。以家兔为试验动物,研究粗提细菌素对家兔创伤面积和免疫炎症因子影响,探究细菌素对金黄色葡萄球菌性外伤感染的治疗效果。一枯草芽孢杆菌细菌素的制备及体外抑菌实验采用酸沉淀法粗提枯草芽孢杆菌细菌素,通过圆纸片扩散法测定枯草芽孢杆菌无细胞抗菌液和枯草芽孢杆菌粗提细菌素对各试验菌株的抑菌力。结果表明:枯草芽孢杆菌细菌素对葡萄球菌属革兰氏阳性菌有抑制作用,其中对鹅金黄色葡萄球菌的抑菌圈最大约为10.5 mm,对白色葡萄球菌无抑制作用;对革兰氏阴性菌如山羊节杆菌、鸭奇异变形杆菌、鹅沙门氏菌均有抑菌作用,其抑菌直径分别为 8.0 mm、7.5 mm、3.0 mm。枯草芽孢杆菌粗提细菌素与无细胞抗菌液相比,抑菌谱相同,枯草芽孢杆菌粗提细菌素明显强于无细胞抗菌液体外抑菌力。二粗提枯草芽孢杆菌细菌素在小鼠中的应用研究试验共分6组:生理盐水对照组（对照A组）、4×109 CFU/mL枯草芽孢杆菌组（B组）、稀释10倍细菌素组（高剂量C组）、稀释100倍细菌素组（中剂量D组）、稀释1000倍细菌素组（低剂量E组）、无细胞抗菌液（F组）。结果如下:（1）高、中、低剂量粗提枯草芽孢杆菌细菌素与无细胞抗菌液对灌胃小鼠4周的体增重没有显著影响。（2）高剂量C组和中剂量D组的灌胃小鼠胸腺指数较对照A组显著提高23.4%和27.0%（P＜0.05）,不同剂量细菌素与无细胞抗菌液对灌胃小鼠肝脏、脾脏、肾脏指数无显著影响。（3）试验第4周末枯草芽孢杆菌显著降低灌胃小鼠血清AST和ALT活性、并显著提高TP和ALB水平（P＜0.05）;不同剂量粗提细菌素与无细胞抗菌液对灌胃小鼠血清AST、ALT、TP和ALB无显著影响。（4）枯草芽孢杆菌在第2周后可显著提高小鼠粪便乳酸杆菌和双歧杆菌数;第4周末,低剂量细菌素较对照和中、高剂量细菌素能显著提高小鼠粪便乳酸杆菌数数量（P＜0.05）。（5）枯草芽孢杆菌显著提高灌胃小鼠血液GSH、T-AOC和T-SOD活性、显著降低MDA活性（P＜0.05）;低剂量细菌素显著提高灌胃小鼠血液GSH水平,但不同剂量细菌素与无细胞抗菌液对小鼠血液T-AOC、T-SOD和MDA无显著影响。三粗提枯草芽孢杆菌细菌素在家兔外伤感染上的应用研究将外伤感染金黄色葡萄球菌的家兔随机分为5个不同方法治疗组,每组5只,分别为对照组、高剂量（细菌素原液稀释5倍）、中剂量（细菌素原液稀释10倍）、低剂量细菌素（细菌素原液稀释20倍）组及磺胺嘧啶银组。试验结果如下:（1）干预后3d,细菌素组和磺胺嘧啶银组疮面面积显著小于其他试验组（P＜0.05）;且干预后7d,高剂量细菌素组创面面积小于磺胺嘧啶银组（P＜0.05）。高剂量细菌素（细菌素原液稀释5倍）组治疗效果最佳。（2）干预7d后,高剂量细菌素组TNF-α,IL-6水平显著性降低（P＜0.05）,但显著高于磺胺嘧啶银组（P＜0.05）;高剂量细菌素组IgA、IgG水平显著高于对照组和中、低剂量细菌素组（P＜0.05）,同时显著低于磺胺嘧啶银组（P＜0.05）。结论:本研究筛选、分离和确证得到一株枯草芽孢杆菌,并粗提该菌株所产细菌素。粗提枯草芽孢杆菌细菌素对金黄色葡萄球菌属具有较强体外抑菌力;对灌胃小鼠相关免疫器官发育、血清抗氧化性能、粪便有益菌具有改善作用;能显著减小家兔外伤感染金黄色葡萄球菌的创面面积,促进MRSA感染慢性创面愈合,降低炎症反应。
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