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高油酸菜油是指油酸含量高于75%的油菜油脂,具有良好的保健作用和耐储藏特性,在烹饪高温下不易产生油烟,是可以与茶油、橄榄油相媲美的高级食用油脂。因其生产成本和种植难度远低于上述两种高品质油料作物,高油酸油菜生产技术的开发,已经成为我国改善高级食用油供给层面的重要方向。长期以来,人们对油菜的基因工程研究一直着眼于生产实际,以往对多种油菜脂肪酸去饱和酶基因的研究发现,即使让这些基因沉默也依然无法完全阻碍多不饱和脂肪酸的合成,对油酸含量的继续提升形成限制。因此,目前研究主要集中在已知通路上脂肪酸去饱和酶基因以及通过其他途径影响油菜种子油酸量基因方面。本研究从经复合诱变形成的高油酸含量的甘蓝型油菜保持系100B、未经诱变的甘蓝型油菜保持系100B及低油酸甘蓝型油菜品种中油821中分别克隆了脂肪酸去饱和酶fad2基因和一种与油酸合成相关的基因BnaLCR78,研究这两个基因的表达模式,并构建了相应的RNAi载体。具体内容如下:(1)从三种材料中均获得了两个类型的fad2基因:Bnfad2-Ⅰ和Bnfad2-Ⅱ,其中Bnfad2-Ⅰ能够编码完整的蛋白,而Bnfad2-Ⅱ基因翻译提前终止。(2)Bnfad2-Ⅰ在不同组织中的表达结果表明,Bnfad2-Ⅰ的表达不同于前人提出的HO1和H02模式。(3)从三种材料中分别获得了BnaLCR 78全基因序列和CDS序列,序列全长376bp,CDS区域长237bp。高油酸材料中BnaLCR78基因的cDNA存在两种形式形式,一种是去掉内含子的常见形式,另一种是保留了内含子的形式。系统进化树的分析结果表明这一基因与拟南芥LCR基因家族比较接近。蛋白预测结果发现,BnaLCR78具备与SLR1(S locus-related glycoprotein 1)转录抑制蛋白结合的结构域。(4)BnaLCR78定量PCR的结果表明,高油酸材料的茎中,BnaLCR78的表达水平明显高于低油酸材料和对照材料中该基因的表达水平。在开花后35d的果荚中,三种材料的BnaLCR78基因的表达水平均高于开花后27d的果荚该基因的表达水平。推测BnaLCR78基因的表达与种子发育后期脂肪酸合成有密切联系。(5)我们分别利用Bnfad2基因的三个不同保守区构建了三个RNAi载体,构建了含有BnaLCR78基因不同区段的两个RNAi载体,为将来通过遗传转化进一步研究两个基因对甘蓝型油菜脂肪酸合成途径的影响,以及培育出高油酸含量的甘蓝型油菜材料奠定一定基础。