【摘 要】
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花生是世界上重要的油料作物,利用微生物菌剂提高产量、减少化肥施用更符合可持续发展的理念。本研究通过GFP标记、利福平标记联合扫描电镜的方法,对耐酪氨酸束村氏菌（Tsukamurella tyrosinosolvens）P9和吡咯伯克霍尔德氏菌（Burkholderia pyrrocinia）P10在花生幼苗的定殖规律进行分析,并对2个菌株接种花生根际土壤细菌多样性的影响进行分析,以综合解析2个不同
【基金项目】
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国家自然科学基金项目“PGPR菌株Tsukamurella sp.P9、Burkholderia sp.P10与花生互作机制的比较研究”（31760030）；
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花生是世界上重要的油料作物,利用微生物菌剂提高产量、减少化肥施用更符合可持续发展的理念。本研究通过GFP标记、利福平标记联合扫描电镜的方法,对耐酪氨酸束村氏菌（Tsukamurella tyrosinosolvens）P9和吡咯伯克霍尔德氏菌（Burkholderia pyrrocinia）P10在花生幼苗的定殖规律进行分析,并对2个菌株接种花生根际土壤细菌多样性的影响进行分析,以综合解析2个不同种属PGPR菌株对花生促生的根本机制。主要研究结果如下:利用热激转化法、将含有绿色荧光蛋白GFP基因的质粒pHT315-GFP导入耐酪氨酸束村氏菌P9和吡咯伯克霍尔德氏菌P10菌株中,获得的阳性转化子P9-GFP和P10-GFP可在荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光;利用GFP标记的2株PGPR菌株接种花生幼苗,发现2株菌均能聚集和定殖于花生的根茎组织中。通过逐级驯化的方式获得可耐受300mg/mL利福平的抗性菌株P9r和P10r,其具有良好的遗传稳定性,与未驯化的原始菌株形态、生长曲线及促生指标基本一致,对花生的促生效应与原始菌株也相似;对P9r、P10r及混合菌株接种花生的定殖动态监测表明,P9r、P10r先定殖在花生的根围土壤中,后逐渐迁移并稳定定殖到花生的根、茎组织中;至30 d时,根茎组织中的P9r活菌数为1.08×10~4CFU/g,P10r为5.33×10~4CFU/g;且对于混合菌株接种而言,P10r菌株的定殖数高于P9r,表明P10r的竞争定殖能力更强;扫描电镜也观察到2个菌株在根茎组织中的定殖。单菌株及混合菌株接种对花生根际土壤细菌多样性的影响分析表明,与未接种对照相比,3个接种组的细菌群落相似性更高;接种组的拟杆菌门及厚壁菌门的丰度略微增高,芽孢杆菌属（Bacillus）、链霉菌属（Streptomyces）等有益菌的丰度较CK有不同程度增加。研究结果表明,2个不同种属的PGPR菌株不仅可以定殖在根围土壤及花生的根茎组织上,而且可以通过改变土壤的细菌群落结构来促进花生的生长,这为下一步的田间实验以及微生物菌剂的研制奠定了一定的理论基础。
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