钩端螺旋体病(leptospirosis,简称钩体病)是由致病性钩端螺旋体(简称钩体)感染引起的全球性人兽共患传染病,流行范围广,危害大。在我国,多发生于水稻种植区域,是洪涝灾害时重点监控的传染病之一。钩端螺旋体属分两个种：问号钩端螺旋体和双曲钩端螺旋体；前者是寄生性、致病性的问号钩端螺旋体,可分离自病人、动物或者带菌者；后者是非致病性钩端螺旋体,通常对人和动物不致病,除少数菌株外均来自地表水。钩体病的早期诊断对于钩体病的治疗和预后很重要,目前诊断钩体的方法有钩体菌分离培养法、经典方法显微凝集试验(microscopic agglutination test, MAT)、动物接种以及分子生物学技术检查等。各种方法均具有一定的优缺点和适用性,例如,分离培养耗费时间长、检出阳性率低；MAT具有快速和灵敏的特点,但该检测方法存在一定的局限性,如耗费血清抗体量大、检测时效性低、结果易受各种因素影响等；PCR和荧光定量PCR存在操作复杂和仪器昂贵等问题,在一些发展中国家和现场检测方面受到限制。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)是2000年日本荣研公司Notomi博士研发出的一种新型等温核酸扩增方法。本研究旨在建立环介导等温扩增技术快速检测钩端螺旋体,并应用于钩体的现场环境检测,为钩体病原菌的快速检测、现场流行病学调查和现场疾病监测提供基础。本研究实验中的LipL32是钩体外膜重要蛋白,仅存在致病性钩体中,含量占的外膜总蛋白75%,是引起人和动物免疫的重要蛋白。本研究以钩体外膜蛋白LipL32基因为目的基因,下载我国15群15型钩体标准参考菌株序列,设计LAMP引物,并以荧光定量PCR和普通PCR为对照,依次进行菌株样本灵敏度检测、特异性检测(98株菌)、模拟样本研究和现场实践研究(69个样本)。结果：探针法荧光定量PCR检测下限为2copy/μL; LAMP检测下限为200 copy/μL,同染料法荧光定量检测下限一样,比普通PCR方法灵敏100倍；特异性检验结果良好,扩增56株钩体结果为阳性,检测25株非钩体结果为阴性；模拟样本检测下限为200条钩体/μL(煮沸法)和200条钩体/μL(试剂盒提取法)。在现场采集标本检测研究中,不同的检测方法的结果一致,LAMP对现场采集标本的检出率同荧光定量法一致,高于普通PCR方法。本次LAMP研究,针对致病性钩体LipL32基因设计的引物,特异性好,灵敏度比普通PCR高两个数量级,可以应用于不同血清型、群的钩体检测,也可以用于现场采集标本的检测。LAMP实验操作简单,对设备要求不高,可以用于现场快速检测钩体。