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目的:1、研究高龄患者呼吸机相关性肺炎的病原菌分布及耐药情况。2、探讨引起呼吸机相关性肺炎的铜绿假单胞菌耐药机制。3、对多药耐药铜绿假单胞菌进行体外联合药敏试验,为临床合理用药提供依据。方法:1、收集2007年1月~2011年6月诊断为VAP的高龄患者123例,研究其病原菌分布及耐药情况。2、将两周之内,同一患者且对某一类抗菌药物药敏有变化的两株铜绿假单胞菌配为一对,其中碳青霉烯类20对,喹诺酮类22对,氨基糖苷类15对,多粘菌素B10对。收集来自30个高龄VAP患者的PA122株。3、琼脂稀释法检测PA对14种抗生素的MIC、外排泵表型。PFGE法检测基因同源性。双纸片协同法检测金属酶表型。PCR法检测耐药基因。结晶紫染色法检测细菌生物被膜形成能力。扫描电镜观察生物被膜。棋盘法设计,琼脂稀释法行体外联合药敏。结果:1、123例高龄老年VAP患者共检出细菌409株,其中革兰氏阴性菌355株,革兰氏阳性菌54株,革兰阴性菌中铜绿假单胞菌24.44%、鲍曼不动杆菌17.11%、嗜麦芽窄食单胞14.67%、洋葱伯克霍尔德菌7.58%;革兰阳性菌中以金黄色葡萄球菌9.05%为主。铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药性较高。2、所收集的配对PA菌株共来自30个患者,其中70%的患者痰标本分离的配对菌株经PFGE证明为同一基因来源,30%的患者痰标本分离的配对菌株经PFGE证明为不同基因来源。3、4个患者共8株菌扩增出OXA-1基因,3个患者共6株菌扩增出OXA-10基因,仅一个患者1株菌扩增出GES基因,13个患者共33株菌扩增出OprD2基因,余菌株为OprD2基因缺失或部分缺失菌株。未扩增出KPC、GIM、OXA-2、VIM及IMP耐药基因。同一患者来源且经PFGE证明为同一基因来源的菌株中,PCR法检测其耐药基因型如OXA-1、OXA-10、GES、OprD2并不完全一致。仅有一个患者分离的共4株菌金属酶表型阳性。5个患者共9株菌外排泵表型阳性。所有菌株均有不同程度的生物膜形成能力。4、各组药物联用后,除TZP和CIP联合主要表现为无关作用外,其他组合均主要表现为协同和相加作用,浓度-累积抑菌百分率曲线均左移。结论:(1)PA在高龄VAP患者中分离率占首位,且高度耐药。(2)70%老年PA-VAP患者自身不同时间点所分离的PA为同一基因来源。(3)PA的高度耐药为以产生物膜为主的多种机制共同作用结果。(4)MDRP可选联合用药方案。