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甲基苯丙胺((+)-methamphetamine,METH)滥用已成为一个全球公共卫生问题,造成重大的疾病及经济负担。目前没有批准可用于治疗METH滥用的药物,疫苗为治疗METH提供了一个新的策略。首先,为了建立一种合适的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测抗METH抗体,本研究第一部分先合成METH半抗原,再将METH半抗原分别与破伤风类毒素(TT)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,成功制备METH免疫抗原TT-METH与包被抗原BSA-METH,偶联率分别为73:1及20:1。然后将TT-METH偶联疫苗免疫小鼠,制备抗血清。利用BSA-METH包被酶标板检测抗METH抗体,进行ELISA条件的摸索优化,最佳包被缓冲液为PBS,包被蛋白浓度为2 μg/ml,包被条件为37℃2h后4℃过夜;最佳封闭液为5%脱脂奶粉,封闭条件为37℃2h;最适的酶标抗体浓度为1:3000(1.33μg/ml),37℃孵育1h;底物最佳显色时间为15min。实验批内变异系数及批间变异系数均在5%以内,重复性较好。包被抗原不与TT免疫小鼠后的血清发生反应且抗TT-METH的血清不与BSA发生反应,特异性较好。其次,为了建立简便的体内生物材料中METH的液相色谱质谱联用(LC/MS)检测分析方法以研究疫苗对METH体内分布的改变,本研究第二部分首先进行了生物材料中METH不同提取方法的比较,提取率较高的为甲醇结合超声提取。然后对所建立的方法进行评价,所建立的方法专属性好,在10-2000ng/ml的范围内的线性良好,相关系数(r2)在0.9995-0.9999之间,回收率在96%-102.12%之间,精密度良好,变异系数(CV)<5.72%,处理后的样品稳定性较好。最后利用建立的LC/MS分析方法研究了不同剂量的METH在小鼠体内的血脑分布。研究显示0.5-4 mg/kg剂量下血液及脑组织中METH的浓度均在15 min时最高,随后逐渐递减。不同时间点血液及脑组织中的浓度均具有剂量依赖关系,血液中的METH含量与脑组织中的METH含量在剂量为0.5-4 mg/kg范围内呈线性依赖关系。最后,我们开发了一种新型的油包水型纳米乳佐剂(命名为NES01)用于TT-METH疫苗中。NES01平均粒径为62.9 nm,多分散系数为0.146,颗粒分布均匀。NES01稳定性较好。将NES01佐剂联合TT-METH免疫小鼠具有良好的安全性,能够有效增强TT-METH疫苗的抗体水平,显示出较好的佐剂效果。综上所述,本研究成功合成METH抗原TT-METH及BSA-METH,并建立了抗METH抗体的ELISA检测方法;建立了小鼠体内METH的LC/MS检测方法。开发一种新型纳米乳佐剂NES01,具有较好的佐剂效果,可作为METH疫苗的一种候选佐剂。