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目的:分析内蒙古地区住院病人分离苯唑西林敏感甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(OS-MRSA)临床株耐药性及分子流行病学特征,探究亚抑菌浓度苯唑西林对OS-MRSA生物膜形成能力的影响效应及分子机制。方法:1.采用微量肉汤稀释法筛选苯唑西林敏感金黄色葡萄球菌,采用PCR方法检测菌株携带mec A和mec C基因情况,确认OS-MRSA株。2.采用自动化仪器法检测OS-MRSA株对常用抗菌药物耐药性;采用菌群分析方法(PAP)检测OS-MRSA株对苯唑西林异质性耐药特征;3.采用MLST、SCCmec分型、spa分型及PFGE分型方法对OS-MRSA株进行分子分型,筛选优势基因型;4.采用乳胶凝集实验检测OS-MRSA株PBP2a蛋白表达量;5.采用PCR方法检测OS-MRSA株毒力基因(sea,seb,sec,sed,see,tsst-1,pvl,hla,hlb,hld,mp HLG1,mp HLG2,eta,etb,ica A,ica B,ica C,ica D,clf A,clf B,fnbp A,fnbp B,bap)携带情况。6.采用结晶紫染色方法检测OS-MRSA株生物膜形成能力及1/2MIC亚抑菌浓度苯唑西林对其影响效应;采用PIA、e DNA及蛋白降解实验,观察OS-MRSA株生物膜中PIA、e DNA及蛋白含量变化与其生物膜形成能力之间的相关性;7.采用实时荧光定量PCR方法检测苯唑西林暴露对OS-200株生物膜形成相关调控基因(ica A、ica B、ica C、ica D、sig B、sig S)m RNA相对表达量的影响。8.采用基因敲除技术构建sig S基因缺失OS-200株;采用秀丽隐杆线虫感染模型观察sig S基因敲除前后,OS-200株毒力变化特征;采用结晶紫染色方法,比较sig S基因敲除前后,OS-200株生物膜形成能力变化特征及与sig S基因之间的相关性。结果:1.研究期间共检出21株OS-MRSA株(1.4%,21/1500),均为mec A基因阳性,而mec C基因阴性。90.48%(19/21)菌株对头孢西丁和苯唑西林均敏感,9.52%(2/21)菌株对头孢西丁耐药;2.21株OS-MRSA菌株对苯唑西林均呈现异质性耐药特征,苯唑西林高水平耐药亚群检出频率介于10-9~10-5之间。3.21株OS-MRSA的MLST和spa分型呈多样化趋势,ST22-t309,ST398-t051均占14.29%(2/21)。ST398为优势基因型(19.05%,4/21)。52.38%(11/21)菌株为SCCmec IV型,检出1株(4.76%,1/21)SCCmec I型菌株(OS-678)。4.38.1%(8/21)OS-MRSA菌株PBP2a乳胶凝集试验呈阳性。5.毒力基因(hla,hld,ica A,ica B,ica C,ica D,clf A和clf B)携带率分别为90.48%(19/21)、90.48%(19/21)、100%(21/21)、95.24%(20/21)、90.48%(19/21)、100%(21/21)、90.48%(19/21)和95.24%(20/21)。6.OS-MRSA株呈现较强的生物膜形成能力,3株(14.29%)为强产膜株,13株(61.90%)为中产膜株,5株(23.81%)为弱产膜株。与对照组相比,亚抑菌浓度苯唑西林(1/2MIC)作用下,21株OS-MRSA株生物膜形成能力均增强。7.亚抑菌浓度苯唑西林(1/2MIC)作用24小时后,OS-200株生物膜形成及调控相关基因(ica A、ica D、ica B、ica C、sig B、Sar A)m RNA相对表达量分别升高14.26、13.27、133.82、11.67、173.40、43.97倍(p<0.05)。8.成功构建OS-200株sig S基因缺失株。秀丽隐杆线虫感染OS-200-△sig S株及野生株后,OS-200株毒力未发生明显改变。培养96h后线虫主体均良好存活,呈正弦曲线式游动,未出现虫身僵直现象。结晶紫染色结果显示,OS-200-△sig S缺失株生物膜形成能力无明显变化(p>0.05)。结论:1.本研究所得OS-MRSA株多数对头孢西丁敏感,且均呈现苯唑西林异质性耐药特征。实验室常规耐药表型检测方法容易将OS-MRSA株错误鉴定为MSSA,应联合mec A及mec C基因检测方法和耐药表型检测技术,以降低OS-MRSA漏检率。2.亚抑菌浓度苯唑西林可显著促进OS-MRSA生物膜形成,这种促进效应主要与ica操纵子表达上调进而增加PIA合成有关。3.亚抑菌浓度苯唑西林主要通过活化sig B及下游Sar A调控基因,促进OS-MRSA ica ADBC基因表达;sig S基因在此调控过程中无明显作用。