鸡马立克氏病发病过程中HSP60表达和mRNA转录的动态变化及其相关性研究

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热休克蛋白(heat shock proteins, HSPs)是组织细胞在应激因素刺激下所产生的一组高度保守的蛋白家族,它不仅在机体各种应激状态下会过量表达,在某些肿瘤组织中也会出现异常表达,参与肿瘤细胞的增殖、凋亡、耐药机制及与肿瘤相关的免疫反应,与肿瘤的发生、发展密切相关。而作为重要代表成员之一的HSP60,对其在肿瘤发病学中的表达和作用的研究则较少,尤其在禽肿瘤性疾病中的研究国内尚未见报道。基于以上背景,本研究取1日龄SPF雏鸡分为MDV-RB1B病毒接种组,HVT疫苗免疫组及无感染、无免疫空白对照组,3组均依次接种ND+H9AI灭活和ND弱毒疫苗,成功建立鸡MD肿瘤模型。各组定期采外周血通过HA/HI方法测定血清中ND和H9AI的抗体滴度,反映MDV引起的免疫抑制情况,ELISA方法检测血清中HSP60抗体含量的动态变化;定期剖杀采集主要器官组织,制作石蜡切片,HE染色以观察组织病理学变化,免疫组织化学染色检测HSP60在各器官组织中的分布,ELISA检测组织内HSP60含量的动态变化,实时FQ RT-PCR技术定量检测组织内HSP60mRNA的转录水平。分析在肿瘤发病机体内HSP60在核酸及蛋白水平上的变化规律,探讨其变化与肿瘤发生、发展的相关性,为进一步研究HSP60在肿瘤发病学中的作用奠定基础,同时也为动物肿瘤病的诊断和新型治疗药物的研发提供新思路。实验结果表明,本试验成功建立了MD动物肿瘤模型,病毒株感染后,自21日龄起各内脏器官先后出现灰白色或黄白色肿瘤结节,病理组织学检查肿瘤组织为多形态淋巴样细胞;MDV感染迅速导致机体的持续性免疫抑制,攻毒组在21~42日龄检测血清中ND抗体滴度显著低于对照组(P<0.05),在14~42日龄检测H9AI的抗体滴度始终极显著低于对照组。攻毒组血清中HSP60的抗体水平始终高于两对照组,28~86日龄间差异达极显著水平(P<0.01);HSP60在试验鸡体内各组织器官瘤细胞胞浆内均呈强阳性表达,在瘤灶外仅肝脏和肾脏组织细胞的胞浆中有少量阳性表达;在试验期内攻毒组各组织内HSP60的表达量、mRNA转录水平均始终高于两对照组,不同组织呈显著或极显著性差异,但HSP60的表达量与mRNA转录水平之间未呈一致的对应关系。本研究结果表明:MDV-RB1B病毒株感染可引起速发性内脏型MD肿瘤,会显著抑制ND和H9AI的免疫反应;在肿瘤发生发展过程中,血清内HSP60抗体水平升高,肿瘤病灶及周围组织内HSP60的表达量增加,HSP60mRNA转录水平也相应增加;HSP60表达量同其mRNA转录水平的变化趋势并非完全一致的线性关系,两者与肿瘤的发生、发展密切相关,两者的检测对鸡MD的诊断及发病进程的判定有重要的参考价值。
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