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胚胎致死异常视觉Elav基因,是果蝇神经系统发育和功能异常的致死基因。根据果蝇ELAV蛋白质的氨基酸序列,利用家蚕EST数据库,电子克隆出一条Elav基因的同源基因Bm-Elav。进一步以家蚕大造品种L5-3d的丝腺RNA为模板,RT-PCR方法得到Bm-Elav基因的cDNA序列,其ORF框为807 bp,碱基序列与预测序列一致。通过比较分析NCBI数据库中家蚕的全基因组数据,获得了家蚕Bm-Elav的基因组DNA序列,该序列仅包括一个外显子而没有内含子。推测的Bm-Elav基因翻译蛋白质有268个氨基酸,蛋白质结构中有3个RRM基序,属于RRM RNA结合蛋白家族。
将Bm-Elav基因片段克隆到表达载体pET-28a(+),构建大肠杆菌融合表达质粒pET-28a(+).Bm-Elav;将重组质粒转化大肠杆菌BL<,21>,IPTG诱导,成功表达了家蚕Bm-Elav基因的融合蛋白,为研究Bm-Elav功能奠定了基础。
为了探讨Bm-Elav基因的功能,调查了Bm-Elav基因的时空表达。以A3基因为内标,根据构建的Bm-Elav基因优化半定量RT-PCR方法,调查了家蚕产下后0.5 h、30 h及活化时期的卵;5龄3 d和6 d、吐丝1 d、蛹期3 d和6 d时期的卵巢和脂肪体;5龄3 d和6 d、吐丝1 d时期的中肠、丝腺和造血器官组织Bm-Elav基因的差异性表达。结果显示,家蚕Bm-Elav基因在幼虫、蛹期的表达没有时期、组织显著差异性,而在活化卵中没有表达。推测家蚕Bm-Elav基因在卵活化后的胚胎发育期表达可能会导致出现非正常视觉而致死。