论文部分内容阅读
背景：肾功能衰竭是一种常见的临床疾病。近年来随着移植免疫的深入研究和新型免疫抑制剂的临床应用，其预后得到了明显改善，早期存活率大幅度提高，因此肾移植被认为是治疗终末期肾病患者的有效方法，备受关注，但是术后免疫排斥反应的发生仍然是影响移植肾长期存活的危险因素。因此进一步研究肾移植受者体内移植排斥的具体机制以及寻找一种能够有效监测移植肾功能状态的临床指标，将具有十分重要的临床意义。目的：通过检测移植治疗前后过程中移植肾受者外周血中的调节性T细胞，效应性T细胞及其血清中细胞因子IL-2，IFN，TNF，IL-4，IL-6和IL-10的表达水平，并与临床指标之间进行相关性分析，探讨这些免疫细胞及细胞因子在移植后免疫排斥发病机制中的作用，进一步评估其在临床意义。方法：通过流式细胞技术检测肾移植治疗前后患者和健康人外周血调节性T细胞和效应性T细胞亚型及其相关细胞因子的表达，采用微量样本多指标流式蛋白定量技术（CBA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测IL-2，IFN，TNF，IL-4，IL-6和IL-10细胞因子的含量，并分析其与临床指标之间的关系。临床指标中血细胞计数、血沉、肌酐、尿素氮、肾小球滤过率等均由检验科专科医生完成。结果：1.终末期肾衰竭患者外周血中CD4+CD25-Foxp3+T细胞数量较健康对照组明显增加，而CD4+CD25+Foxp3+和CD4+CXCR5+Foxp3+T细胞数量与健康对照组无明显变化；2.在移植后，与移植前以及健康对照组相比，肾功能稳定组外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞和CD4+CXCR5+Foxp3+T细胞数量明显增高，而肾功能稳定组患者外周血中CD4+CD25-Foxp3+T细胞数量明显减少；3.在移植后，急性排斥反应组和亚急性排斥反应组患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+T和CD4+CXCR5+Foxp3+T细胞数量明显低于移植前和健康对照组，而移植后CD4+CD25-Foxp3+T细胞数量高于移植前和健康对照组；而与亚急性排斥反应组相比，急性排斥反应组患者外周血中的CD4+CD25-Foxp3+T细胞明显增多，CD4+CD25+Foxp3+和CD4+CXCR5+Foxp3+T细胞明显减少；4.终末期肾衰竭患者外周血中CD4+IFN-γ-IL-17+Th17，CD4+IFN-γ+IL-17-Th1和CD4+IFN-γ+IL-17+Th1/17T细胞数量较健康对照组明显增加；5.在移植后，与移植前相比，肾功能稳定组外周血中CD4+IFN-γ-IL-17+Th17,CD4+IFN-γ+IL-17-Th1与CD4+IFN-γ+IL-17+Th1/17细胞数量明显减少；而外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞数及其与CD4+IFN-γ-IL-17+Th17细胞比例增高；6.在移植后，在急性排斥反应组和亚急性排斥反应组患者外周血中CD4+IFN-γ-IL-17+Th17，CD4+IFN-γ+IL-17-Th1和CD4+IFN-γ+IL-17+Th1/17T细胞数量明显高于移植前和移植稳定组；此外，急性排斥反应组患者外周血中的CD4+IFN-γ-IL-17+Th17, CD4+IFN-γ+IL-17-Th1和CD4+IFN-γ+IL-17+Th1/17T细胞数量低于亚急性排斥反应组；7.终末期肾衰竭患者血清中IL-2，IFN-γ，TNF-α，IL-4，IL-6，IL-10及IL-17的浓度较健康对照组明显增加；8.在移植后，与移植前以及稳定组相比，各组移植排斥组患者血清中IL-2，IFN-γ，TNF-α和IL-17浓度更高，IL-10浓度更低；而血清中IL-4和IL-6的浓度在各移植组前后无显著差异；9.在移植后，与亚急性排斥反应组和慢性排斥组相比，急性排斥反应组患者血清中IL-2，IFN-γ，TNF-α和IL-17浓度更高，IL-10浓度更低，而血清中IL-4和IL-6的浓度在各组移植前后无显著差异；10.相关性分析显示各组移植患者血清中IL-17和IFN-γ浓度分别与CD4+IFN-γ-IL-17+Th17细胞数和CD4+IFN-γ+IL-17-Th1细胞数呈正相关，此外，各组移植患者外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞与CD4+IFN-γ-IL-17+Th17细胞的数量呈负相关；11.相关性分析显示各组移植患者中外周血中CD4+CD25+Foxp3+和CD4+IFN-γ-IL-17+Th17细胞分别与eGFR和血清肌酐水平呈正相关；血清中TNF-α和IL-17水平与血清肌酐水平呈正相关；相反，各组移植患者血清中IL-10浓度与血清肌酐水平呈负相关。结论：1.调节性T细胞在肾脏移植排斥反应中起着重要的作用；2.效应性T细胞及其分泌的效应细胞因子（IL-2，IFN-γ，TNF-α，IL-4，IL-6，IL-10及IL-17）可能参与肾脏移植排斥反应的发病过程；3.在各组肾移植排斥反应组中Treg细胞与Th17/Th1细胞呈负相关性；4.在肾脏移植后，各组肾移植受者血清中CD4+T细胞分泌的细胞因子的浓度与血清肌酐浓度具有一定的相关性，表明血清中细胞因子水平在移植排斥反应中可以作为一项临床监测指标，为预防抑制排斥反应的发生提供了新的思路，具有一定的临床意义。