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马立克氏病(Marek’s disease,MD)肿瘤相关表面抗原(Marek’s diseasetumor-associated surface antigen,MATSA)是MD肿瘤细胞和MD成淋巴系细胞表面存在的特异性抗原,可刺激机体产生对MD免疫非常重要的抗肿瘤免疫应答,并可用于MD的鉴别诊断。本研究用纯化的MATSA免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,并对阳性杂交瘤细胞染色体进行分析。将阳性杂交瘤细胞株接种Balb/c小鼠制备单克隆抗体(McAb)腹水,硫酸铵盐析法粗提McAb并鉴定亚类。通过制备MATSA的McAb,为进一步研究MD肿瘤提供试验材料和理论依据。研究取得如下结果。1.以纯化的MATSA为抗原免疫5只Balb/c小鼠,共免疫6次,间接ELISA测定小鼠血清中MATSA抗体。结果表明,第3次免疫后,测得各小鼠血清中抗体效价分别为26、26、24、26、26;第4次免疫后,抗体效价分别为26、26、26、26、27;第5次免疫后,抗体效价分别为28、28、28、28、28;第6次免疫后,抗体效价分别为213、213、213、213、213,抗体效价明显升高,可以用于制备MATSA的McAb。2.先后取免疫好的2只小鼠脾细胞,进行了2次细胞融合,第一次用3号小鼠,融合后未出现杂交瘤细胞,第二次用1号小鼠,融合后铺4块板,共384个孔,其中116个孔有融合细胞,融合率为30.2%。经间接EL ISA法筛选,抗体阳性孔为22个,阳性率为19%。从阳性孔中选阳性OD值高、生长状态好的孔,用有限稀释法经过3次克隆,筛选到3株能稳定分泌抗MATSA单克隆体的细胞株。杂交瘤细胞传代培养、液氮冻存及复苏后仍能稳定地分泌抗体,ELISA检测阳性细胞培养上清效价达26。3.对筛选出的3株杂交瘤细胞用秋水仙素阻断法进行核型分析,杂交瘤细胞染色体数目为52±2对,接近两种亲本细胞染色体数目总和,证明为两种亲本细胞融合后的杂交体。4.将杂交瘤细胞株细胞腹腔注射100只Balb/c小鼠,收集腹水,腹水中MATSA抗体效价为210。共收集336 mL腹水,经饱和硫酸氨粗提,真空冷冻干燥,获得抗MATSA粗提抗体16.80 g。经MSB1间接免疫荧光染色实验表明,制备的单抗与MSB1细胞有阳性反应。