恶性肿瘤严重威胁着人类的健康。传统的的治疗方法包括：手术切除、放射疗法、化学疗法。手术切除对早期和中期的肿瘤比较有效，但不能阻止肿瘤的转移，也不能杀伤血液中的癌细胞；而放疗和化疗虽然能很快地杀死癌细胞，但对正常细胞也会造成很大伤害，所以传统疗法很难根治肿瘤。因此，肿瘤的靶向治疗已经成为治疗恶性肿瘤的重要途径。　　 随着单克隆抗体(MAb)技术的发展，抗体治疗已经成为治疗肿瘤的新途径。抗体治疗药物相对其他治疗药物具有更高的靶点特异性，毒副作用低，并能够携带其他抗肿瘤药物到达靶细胞，诱发针对机体的免疫反应等特点。目前已经有多种抗体通过临床实验，Herceptin（赫赛汀）是最先通过美国食品药品管理局(FDA)批准的治疗实体瘤的抗体药物，应用于肿瘤的靶向治疗。虽然抗体治疗相对传统治疗有很多优点，但是还存在很多不足：如抗体药物生产成本高，技术很难掌握，而且用量很大，对大的实体瘤的治疗效果不好。　　 自然杀伤细胞（Natural killer cells， NK细胞）是先天免疫系统中的一类淋巴细胞。它表面分布着活化型受体NKG2D。乳腺癌、卵巢癌等大多数上皮肿瘤细胞都存在NKG2D的配体表达，这些配体为主要组织相容性复合体I类(MIC-I)链相关蛋白MICA和MICB，这些配体可以与NK细胞表面的受体结合，诱导NK细胞对肿瘤细胞进行杀伤。NK细胞表面的FcγRⅢ(CD16)与抗体的Fc段识别结合后，使自身活化，诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)，从而杀伤靶细胞。　　 本课题通过改造携带具有治疗实体瘤效果的抗HER-2人源化单克隆抗体Herceptin基因的5型腺病毒载体，在抗体基因的重链恒定3区(CH3)连接上NKG2D配体MICB的基因，构建出Herceptin-NKG2D配体的融合蛋白基因。经过体外实验证明这种携带融合蛋白基因在腺病毒Ad-AT5-MICB是否能表达以及对肿瘤细胞的杀伤情况。该研究为了证明Herceptin-NKG2D配体融合蛋白对肿瘤细胞的抑制和杀伤作用要强于单独的Herceptin抗体的作用，并且能进一步联合NK细胞杀伤肿瘤，高效地诱导ADCC作用，提高对肿瘤细胞的杀伤效果。希望该Herceptin-NKG2D配体融合蛋白能对肿瘤细胞产生“融合蛋白+NK细胞”联合杀伤作用。　　 该课题的实验过程如下：首先将NKG2D的配体MICB的基因片段插入含有全长抗体Herceptin基因的5型腺病毒穿梭载体pDC339-AT5中，与腺病毒骨架载体pBHGloxAEl，3Cr重组，然后在293细胞内进行病毒包装得到非增殖型腺病毒Ad-AT5-MICB，纯化后测病毒滴度。在体外实验中，选用HER-2阳性的卵巢癌SK-OV-3细胞进行乳酸脱氢酶(LDH)释放法杀伤实验，证明融合蛋白的体外杀伤效果。　　 本课题构建的Herceptin-NKG2D配体融合蛋白，同时携带Herceptin全长抗体基因和MICB基因。在体外，该融合蛋白能正常表达且对肿瘤细胞具有较好的杀伤效果。该融合蛋白在裸鼠体内的抗肿瘤效果有待于通过实验进一步实验证明，而初步的实验结果证明了腺病毒介导的融合蛋白基因治疗是一种可行的肿瘤的靶向治疗方案，为肿瘤的靶向治疗提供新依据。