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目的:研究慢病毒介导的miR-16对人脑胶质瘤细胞生物学特性的影响,并探讨其可能的机制。通过对miR-16生物学功能及作用靶点的研究,不仅可以作为新的生物学标准为人脑胶质瘤的早期发现及预后提供预测,更有希望作为新的靶向药物应用于临床中,为胶质瘤的治疗提供新的手段。 方法:首先通过实时荧光定量PCR检测miR-16在人正常脑组织与人脑胶质瘤细胞中的表达情况;实验将细胞分为三组:正常对照组(CON)、阴性对照组(NC)、过表达组(OE),用构建好的miR-16过表达的慢病毒载体和阴性对照慢病毒载体分别感染人脑胶质瘤U87细胞中的过表达组(OE)和阴性对照组(NC),根据荧光表达量来判断感染效率;实时荧光定量PCR检测miR-16在各组U87细胞中的表达,检测P14ARF、Wip1、Bcl2、CyclinD1相关目的基因表达的变化;流式细胞术检测细胞周期变化;DAPI染色法观察胶质瘤细胞核异型性及细胞凋亡的形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡情况;划痕迁移实验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力;CCK-8法、克隆形成法检测细胞增殖能力;Western blot法检测相关目的蛋白P14ARF、Wip1、Bcl2、CyclinD1表达的变化。 结果:miR-16在人正常脑组织中的表达水平明显高于与人脑胶质瘤细胞;慢病毒可成功感染U87细胞,效率均大于90%。在三组U87细胞中,实时荧光定量PCR结果显示,OE组miR-16表达水平与CON组、NC组相比明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05);同时,CON组、NC组P14ARF、Wip1、Bcl2、CyclinD1基因表达相仿,无明显差异,而过表达miR-16(OE组)后,出现P14ARF基因表达水平上调,Wip1、Bcl2、CyclinD1基因表达水平下调,差异均具有统计学意义(P<0.05);流式细胞术结果显示,CON组、NC组细胞的细胞周期分布大致相同,相比无明显差异,OE组出现明显G1期增多,差异具有统计学意义(P<0.05);DAPI染色观察到,CON组、NC组细胞未见明显的细胞核异型性及凋亡,而在OE组,有典型的细胞核异型性改变及细胞凋亡的形态学改变,且出现核异型性改变的细胞所占的比例明显高于其他两组,差异具有统计学意义(P<0.05);AnnexinⅤ-PE/7-AAD双染流式细胞术检测三组细胞的凋亡状态,结果发现,CON组、NC组细胞的早期凋亡率接近,相比无明显差异,OE组早期凋亡率增高,差异具有统计学意义(P<0.05),相比CON组,早期凋亡率提高了2.47倍;划痕迁移实验、Transwell小室侵袭结果显示,OE组细胞的迁移能力、侵袭能力均有明显降低;CCK-8法和克隆形成法进行检测,均显示OE组细胞增殖速率明显变慢。western blot结果显示,CON组、NC组P14ARF、Wip1、Bcl2、CyclinD1蛋白表达水平相仿,无明显差异,而在OE组,则出现了P14ARF蛋白表达量上调趋势,Wip1、Bcl2、CyclinD1蛋白表达量均出现下调趋势。 结论:慢病毒可成功介导miR-16在人脑胶质瘤细胞中高表达,能稳定表达携带的目的基因,并产生稳定的效应。miR-16可影响人脑胶质瘤细胞周期的进程,促进胶质瘤细胞的凋亡,减弱胶质瘤细胞的迁移能力、侵袭能力,抑制胶质瘤细胞的增殖,其可能通过调控胶质瘤细胞中P14ARF、Wip1、Bcl2、CyclinD1等基因和蛋白的表达水平来实现对胶质瘤细胞生物学特性的影响。