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目的:体外培养和诱导供体大鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC),使用趋化因子受体7(chemokine receptor7,CCR7)基因重组腺病毒体外转染imDC,研究其对大鼠同种异体高危角膜移植免疫排斥反应的影响,探讨其诱导免疫耐受的机制。方法:通过联合应用重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colonystimulating factor,GM-CSF)和白细胞介素(Interleukin,IL)-4体外培养、诱导、扩增大量的imDC,通过细胞形态及表型对其加以鉴定;将携带大鼠CCR7基因的重组腺病毒通过增强离心法转染imDC,对转染后的imDC再次进行形态及表型鉴定,并通过细胞免疫荧光检测CCR7的表达;以60只SD大鼠作为受体,30只Wistar大鼠作为供体,通过碱烧伤建立高危角膜移植模型;采用随机数字表法将受体SD大鼠分为空白对照组、未修饰imDC组(imDC组)、 imDC+空载体腺病毒组(imDC+Ad组)和imDC+CCR7腺病毒组(imDC+Ad-CCR7组),每组各15只;各组受体术前7d和术后3d分别经尾静脉注入PBS液、供体来源的未修饰imDC、空载体腺病毒转染后的imDC和携带CCR7基因的腺病毒转染后的imDC(1×107个/只,细胞悬浮于0.1ml PBS液中,空白对照组只注入等量PBS液);术后每日在裂隙灯下观察角膜植片的存活情况并评分,术后14d每组随机处死6只受体大鼠,取角膜植片行HE切片观察以及通过RT-PCR检测Th1型细胞因子IL-2、干扰素-(γinterferonγ,IFN-γ)和Th2型细胞因子IL-4、IL-10的mRNA表达水平。结果:培养的imDC经过倒置相差显微镜及扫描电镜的形态学观察、流式细胞仪进行的免疫学表型检测,可证实为实验所需的imDC;细胞免疫荧光显示imDC不表达CCR7,imDC经空载体腺病毒转染后不表达CCR7,经CCR7腺病毒转染后CCR7表达增加;角膜移植术后,imDC+Ad-CCR7组大鼠角膜植片的混浊、水肿及新生血管程度评分较其他组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);角膜植片平均存活时间(MST):imDC+Ad-CCR7组较对照组、imDC组和imDC+Ad组显著延长,差异有统计学意义(P<0.05);角膜HE切片显示,imDC+Ad-CCR7组植片轻度水肿、基质层板层纤维排列有序,imDC组和imDC+Ad组呈不同程度水肿,基质层板层纤维排列轻度紊乱、有少量的炎性细胞;空白对照组的植片高度水肿、角膜基质板层纤维紊乱,出现大量炎性细胞和新生血管;RT-PCR显示:imDC+Ad-CCR7组Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2mRNA的表达较对照组、imDC组和imDC+Ad组明显降低;Th2型细胞因子IL-4、IL-10mRNA的表达明显升高,差异有统计学意义(均为P<0.05)。结论:通过腺病毒增强离心法转染imDC可使CCR7基因有效转入imDC并表达CCR7蛋白;通过静脉输注供体骨髓来源的经CCR7基因修饰的imDC可以有效抑制高危角膜移植免疫排斥反应,诱导免疫耐受,延长植片的存活时间;经CCR7基因修饰的imDC可能主要通过诱导Th1/Th2偏移参与诱导高危角膜移植免疫耐受。