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水稻是世界上重要的粮食作物之一,由于其基因组较小,遗传背景清晰,成熟的遗传转化体系,与其它禾本科植物存在广泛的共线性等特点,成为单子叶植物研究的模式植物。研究水稻目的基因组功能可以通过创造基因功能缺失突变体这个最为有效的途径进行。构建大量的水稻突变体库在研究水稻功能基因组中占有非常重要的作用。本研究是以水稻籼稻品种Kasalath为受体材料,通过构建pCAMBLA1301—pUC19载体,利用农杆菌侵染的方法转化至水稻中,获得如下结果:
1.利用限制性内切酶HindⅢ、XbaⅠ对pCAMBIA1301和pUC19进行双酶切,然后利用T4连接酶进行连接,成功构建pCAMBIA1301—pUC19载体。
2.以水稻籼稻品种Kasalath成熟胚诱导的愈伤组织为转化受体,利用农杆菌侵染法将pCAMBIA1301—pUC19导入Kasalath中,获得再生植株280棵。
3.通过对农杆菌介导的T—DNA插入遗传转化体系的优化,将对水稻籼稻品种Kasalath得到转基因苗的时间由3个月缩短至36天。通过统计分析Kasalath转化的分化率可达到3.5%。
4.对转基因植株进行PCR检测,结果表明pCAMBIA1301—pUC19已经整合到水稻基因组中。
5.利用质粒营救对转基因植物的T—DNA插入的侧翼序列进行测序,通过与GeneBank数据库进行比对,得到T—DNA插入位置。