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研究背景子宫颈癌是全球女性最常见的妇科恶性实体肿瘤之一,我国子宫宫颈癌的发病人数约占全世界发病人数的1/3。近年来,子宫颈癌的发病和死亡高峰年龄均有年轻化的趋势,这一变化将严重影响年轻女性的生殖健康和生活质量。子宫颈癌的发病与持续的高危型人乳头状病毒(High risk-human papillomavirus,HR-HPV)感染密切相关,然而肿瘤的发生发展一般是多种生物因素共同作用的结果,单独的HPV病毒感染不足以导致肿瘤的发生发展。子宫颈癌发生发展的分子机制,目前仍然未被完全阐明;自噬是近年来新发现的一种与肿瘤发生发展及治疗有着复杂联系的细胞代谢机制,自噬活性可能因为不同肿瘤类型,同一肿瘤的不同部位,同一肿瘤的不同分期,发挥作用有所不同。子宫颈鳞状细胞癌是子宫颈癌最常见的病理类型,属于实体肿瘤,缺氧是其主要的物理特征之一,缺氧有可能降低子宫颈鳞状细胞癌对放射和化学治疗的敏感性,而自噬可能增强肿瘤细胞对抗癌化疗药及放射治疗反应的敏感性。子宫颈癌自噬的发生与缺氧的关系尚不明确,文献报道较少,因此,本研究检测自噬标记蛋白LC3B与缺氧标蛋白CAIX在正常子宫颈上皮组织及子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达,分析两者的相关性以及它们与子宫颈鳞状细胞癌临床病理特征的关系,初步探讨自噬和缺氧在早期子宫颈鳞状细胞癌发生发展中的作用,希望为子宫颈鳞状细胞癌的发生发展机制提供一些新的研究参考价值。目的阐明LC3B和CAIX在正常子宫颈上皮、子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达情况,分析两者的相关性以及与子宫颈鳞状细胞癌临床病理特征的关系,并分析自噬和缺氧对CD34标记的微血管密度形成的影响,初步探讨自噬和缺氧在早期子宫颈鳞状细胞癌发生发展中的作用。方法采用免疫组化法检测72例正常子宫颈上皮、126例子宫颈鳞状细胞癌组织标本中LC3B和CAIX蛋白的表达情况,采用半定量积分法判定阳性结果,采用Western Blot验证LC3B表达与免疫组化法检测结果是否一致,使用SPSS17.0软件进行统计学分析:LC3B,CAIX蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达情况与患者临床病理特征之间的关系采用Mann-whitney U检验或Kruskal-wallis秩和检验;各蛋白之间的相关性分析采用Spearman等级相关检验;采用方差分析CAIX染色评分与LC3B的关系、CD34标记MVD在LC3B与CAIX蛋白表达不同分组中的差异。使用Graph Pad Prism 5.0软件绘制相关统计图,P<0.05为差异具有统计学意义。结果(1)LC3B蛋白主要表达在正常子宫颈上皮的中层及表层,基底细胞层未见明显染色,其高表达率为70.8%(51/72),低表达率为22.2%(16/72),阴性表达率为7%(5/72);在子宫颈鳞状细胞癌组织中LC3B蛋白的高表达率为27%(34/126),低表达率为43.6%(55/126),阴性表达率为29.4%(37/126)。LC3B蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达低于正常子宫颈上皮,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)CAIX蛋白少数表达在正常子宫颈上皮的基底细胞层,上皮中层及表层未见明显表达,其高表达率为8.3%(6/72),低表达率为25%(18/72),阴性表达率为25%(48/72);CAIX蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中的高表达率为29.4%(37/126),低表达率为54%(68/126),阴性表达率为16.7%(21/126)统计结果显示:CAIX蛋白在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达高于正常子宫颈上皮,差异具有统计学意义(P<0.05).(3)LC3B蛋白与CAIX蛋白表达呈正相关,相关系数rs=0.403,P<0.05(4)MVD主要分布于癌灶边缘的间质部,少数癌灶组织中有零散的分布,在同一连续组织切片中,可见CAIX蛋白高表达的部位同时见LC3B蛋白高表达,MVD分布于癌灶边缘,而CAIX蛋白低表达的部位,LC3B低表达或不表达,MVD仍分布于癌灶边缘及病灶组织中有零散的分布。MVD在LC3B蛋白阴性,低表达,高表达三组中的均数分别为31.92±10.02,32.91±9.99,31.06±11.37,三组无统计学差异(P>0.05)。而CD34蛋白在CAIX蛋白阴性,低表达,高表达三组中的均数分别为26.90±9.25,32.57±9.91,34.24±10.92,三组均数比较有统计学差异(P=0.028),,SNK组间比较CD34蛋白在CAIX蛋白低,高表达组的均数无统计学差异,而高低表达组与阴性表达组有差异。(5)LC3B蛋白在子宫颈鳞状细胞癌中的表达与患者的肿瘤大小(P=0.001)及肿瘤细胞分化程度(P=0.035)明显相关,差异有统计学意义,而与患者的年龄,FIGO分期,淋巴结有无转移及术前Scc-Ag值有无异常无明显相关性;CAIX蛋白在子宫颈鳞状细胞癌中的表达只与患者的肿瘤大小明显相关,差异有统计学差异(P=0.028),而与其他病理特征无明显相关性。结论(1)子宫颈鳞状细胞癌组织中存在自噬现象,自噬发生率较低,约为27%。(2)子宫颈鳞状细胞癌组织存在一定的自噬现象,与肿瘤缺氧程度呈正相关。(3)子宫颈鳞状细胞癌组织自噬增强与肿瘤大小相关,与微血管形成可能无关。(4)子宫颈鳞状细胞癌组织缺氧与微血管形成有关:缺氧促进微血管形成。