利用细胞融合技术成功制备的杂交瘤单克隆抗体(mAb)在疾病的预防和诊治等方面显示出了重要作用,但在体内的应用则有诸多限制。抗体库技术为制备高亲和性的抗体提供了有力工具。该技术无需免疫即可制备全人源性抗体,可有效避免鼠源性抗体在人体应用时诱发HAMA产生不良反应。对于无法提纯或抗原性质不确定的肿瘤抗原,必须采用新的筛选系统。抗体与抗原结合后可以经细胞内化的方式将抗原与抗体的复合物吞入细胞内。内化筛选方法可筛选到对于肿瘤导向治疗具有重要作用的内化抗体。目的: 对菌落PCR方法进行研究,探讨在抗体库筛选中的应用价值。筛选出的抗体需要用ELISA方法检测其与抗原的结合能力,对ELISA反应的抗体浓度和作用条件等进行优化,建立稳定的细胞ELISA方法。噬菌体抗体库筛选过程中洗涤液、洗脱液、封闭液、筛选体积以及细胞状态等均对筛选结果产生影响,对筛选条件进行优化,以避免特异性抗体的丢失,同时尽可能减少非特异性抗体。构建大容量的次级噬菌体抗体库,采用细胞内化的方法,筛选可以内化进入肝癌细胞的特异性噬菌体抗体。对筛选出的抗体进行序列分析,进一步对筛选出的抗体进行特异性和抗原定位研究。