猪戊型肝炎血清流行病学调查及病原检测方法的建立

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本研究将应用巢式PCR鉴定猪戊型肝炎病毒,根据GenBank注册的AJ272108等序列,设计内外两对巢式引物,通过巢式PCR方法扩增猪戊型肝炎病毒核酸,并对其进行序列分析和同源性分析,结果表明分离的猪戊型肝炎病毒为基因Ⅳ型。本研究构建原核表达质粒pGEX-HEV,将其转化表达菌DE3,通过IPTG的诱导表达,将表达蛋白进行SDS-PAGE检测,并通过Western blot检测出该融合蛋白具有免疫反应原性。将其作为间接ELISA方法的包被抗原来建立该方法,以用于猪戊型肝炎抗体的检测,即进行猪戊型肝炎血清流行病学调查。本研究根据四种不同基因型序列,设计一对引物和探针,并通过PCR条件的优化来建立实时荧光定量PCR方法,对猪戊型肝炎病毒从cDNA水平上进行检测,以此来检测病原。本研究利用基因工程表达的重组蛋白作为HEV特异性抗体检测的包被抗原而建立的间接ELISA方法来检测血清抗体和以TaqMan探针为基础的实时荧光定量PCR方法来检测环境中和临床样品中的HEV。这两种方法的相互结合为实验室诊断提供了方便,同时为猪戊型肝炎血清流行病学调查和病原的检测提供了技术支撑。从而为人戊型肝炎的研究奠定技术基础。
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