【摘 要】
:
目的:探究糖酵解增强对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)中多巴胺能神经元凋亡、α突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)沉积及外周Th17/Treg轴改变的影响与分子机制。方法:通过腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型,运用行为学和免疫荧光染色、Western blot方法检测造模成功。通过注射HK2抑制剂抑制糖酵解,检测PD小鼠行为学改变、多巴胺能神经元凋亡、α-Syn
【基金项目】
:
国家自然基金项目的资助(No.81771376;No.91849121);
论文部分内容阅读
目的:探究糖酵解增强对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)中多巴胺能神经元凋亡、α突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)沉积及外周Th17/Treg轴改变的影响与分子机制。方法:通过腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型,运用行为学和免疫荧光染色、Western blot方法检测造模成功。通过注射HK2抑制剂抑制糖酵解,检测PD小鼠行为学改变、多巴胺能神经元凋亡、α-Syn沉积、Th17/Treg轴的改变。通过检测PD小鼠黑质区HK2、LDHA的表达量,丙酮酸、乳酸水平以分析糖酵解水平的改变。在乳酸对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系干预后,通过流式染色和Western blot检测细胞凋亡和AMPK/AKT/m TOR通路的改变,以揭示糖酵解对多巴胺能神经元和α-Syn沉积的影响。通过流式细胞术、Elisa法检测帕金森患者外周血中Th17/Treg比例与α-Syn水平,并分析二者之间的相关性。通过流式细胞术在MPTP注射小鼠以及A53T小鼠外周验证Th17/Treg轴的改变。运用Foxp3谱系报告基因的转基因小鼠,并予以MPTP注射构建PD模型,检测PD小鼠模型中Treg的稳定性和功能。磁珠分选来自A53T小鼠与C57BL6对照小鼠的CD4+T细胞,运用RNA-Seq筛选两组小鼠CD4+T细胞之间的差异基因,并且在离体水平和在体水平进行验证;通过构建基因过表达质粒和双荧光素酶报告基因检测法探究α-Syn对该基因转录的影响,并验证该基因在PD模型小鼠中的影响。结果:抑制糖酵解后,PD小鼠黑质区多巴胺能神经元凋亡与α-Syn沉积得到缓解;流式细胞术和免疫荧光染色结果显示免疫细胞活化缓解,主要表现为中枢小胶质细胞活化减少,外周Th17/Treg轴向Th17的转变有所改善。在PD小鼠黑质区,HK2、LDHA表达明显上调,丙酮酸水平下降,乳酸水平上升,这提示PD小鼠黑质区糖酵解增强。而糖酵解终产物乳酸直接干预SH-SY5Y细胞可诱导AMPK/AKT/m TOR通路激活,并促进细胞凋亡;而抑制糖酵解可缓解乳酸堆积和AMPK/AKT/m TOR通路激活。在PD患者的外周血中,Th17比例上升,Treg比例下降,且α-Syn水平在血浆中显著升高,并与Th17的增加和Treg的下降呈正相关。在MPTP诱导的PD小鼠模型和自发PD的A53T小鼠中,外周出现Th17/Treg轴向Th17偏移。此外,流式细胞术提示MPTP注射的Foxp3谱系报告基因小鼠的Treg出现稳定性破坏,且A53T小鼠外周CD4+IL-17A+Foxp3+细胞比例升高,提示Treg向Th17转变的倾向。RNA-Seq结果提示:RORC基因在A53T小鼠的CD4+T细胞、α-Syn干预的Treg和na?ve T细胞中显著上调。与此同时,在MPTP注射小鼠的Th17和Treg中,RORC编码的RORγt也出现显著上调;而双荧光素酶报告基因结果提示α-Syn体外干预可促进293T细胞中RORC基因启动子片段的表达。RORγt抑制剂干预MPTP注射小鼠可缓解小鼠的神经退行性改变以及中枢Th17细胞浸润、外周Th17/Treg失衡。结论:抑制糖酵解可缓解PD中乳酸堆积诱导的AMPK/AKT/m TOR通路激活,进而缓解多巴胺能神经元凋亡与α-Syn沉积。PD中α-Syn沉积通过促进RORC基因转录诱导了Th17/Treg轴向Th17转变,因此,抑制糖酵解可通过缓解α-Syn沉积进而缓解Th17/Treg轴的失衡。
其他文献
第一部分超声心动图评估不同Hb A1c水平T2DM患者右室功能研究【目的】糖化血红蛋白(Glycated hemoglobin A1c,Hb A1c)水平升高与2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者发生心血管疾病和心力衰竭的风险增加密切相关。既往研究表明T2DM患者可出现右室(Right ventricular,RV)功能受损,但Hb A1c水平升高的T2DM
目的:探索大承气汤(dachengqi decoction,DCQD)调节维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)表达保护脓毒症肺损伤(acute lung injury,ALI)的机制,以期为DCQD治疗脓毒症ALI提供科学依据。方法:1.动物实验中,使用盲肠结扎穿刺方法(cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症ALI小鼠模型,并使用DCQD
肺癌是我国和世界死亡率最高的恶性肿瘤,对社会和经济发展造成了沉重的负担。起病隐匿和病情进展迅速常使肺癌患者得不到有效治疗,通过开展早期诊断和早期预防对提高肺癌的生存率尤为重要。苯并[a]芘(benzo[a]pyrene,B[a]P)作为致癌性最高的多环芳烃类(polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)有机物,可以诱导DNA损伤和基因组改变。B[a]P进入机体后,在
目的 类风湿关节炎(RA)是一种炎症性自身免疫疾病,目前不能被完全治愈。乌头汤是治疗RA的经典方剂,具有抗炎镇痛作用。本研究通过体内外模型,探讨乌头汤是否通过沉默信息调节蛋白(SIRT1)去乙酰化调控高迁移率族蛋白1(HMGB1)及其下游信号通路,改善RA炎症。方法1.ELISA法检测RA患者与健康人血浆中HMGB1蛋白表达,RT-PCR法检测PBMC中HMGB1、SIRT1和PGC-1αm RN
在信息技术的支持下,我国建筑行业逐步朝着智能化方向发展,并实现建筑功能服务与系统管理一体化。但目前我国多数智慧楼宇综合服务系统存在着信息难统一、共享困难等问题。基于此,借助BIM技术,提出一种智慧楼宇综合服务系统设计,希望能够为智慧楼宇建设提供帮助。
第一部分:人口腔细菌定植改变与脂味觉减退、内脏脂肪堆积和胰岛素抵抗密切相关目的:探究人口腔细菌定植与脂味觉减退和内脏脂肪堆积及胰岛素抵抗的关系。方法:对受试者进行问卷调查、体格检查,收集血标本进行生化指标检测。根据腰围(WC)定义腹型肥胖(A-Ob)组和非腹型肥胖(NC)组,代表过多和正常的内脏脂肪含量人群,根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)定义胰岛素抵抗(IR)组和胰岛素敏感(IS)组。通过3
背景:阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)是临床上一种常见的睡眠呼吸调节障碍性疾病,以慢性间歇性低氧(CIH)和睡眠片段化为主要特征,是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的独立危险因素,严重危害人民生命健康和增加国家经济负担。多项研究显示受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)介导的坏死性凋亡和核因子E2相关因子2(NRF2)调控的氧化应激在NAFLD发病机制中扮演着重要作用。然而,OSAHS中
目的:急性主动脉夹层是一种威胁生命的疾病,主要表现为主动脉内膜层的撕裂或主动脉壁内出血,从而导致主动脉壁层分离形成真假腔。目前主动脉夹层病理生理机制仍未阐明,因此,进一步探索其发病机制对于其临床预防和治疗具有重要意义。p66Shc作为一种感知线粒体氧化还原状态的蛋白,与线粒体的氧化应激密切相关。在糖尿病肾病的研究中,活化蛋白C(a PC)通过增加p66Shc的启动子区甲基化水平来降低其表达,从而对
目的:靶向Hippo信号通路尤其是下游的转录共激活因子TAZ(Transcriptional Coactivator with PDZ-binding Motif,含PDZ结合序列的转录共激活因子)可以有效抑制肿瘤的进展。然而,TAZ并不适用于靶向酶活性的药物研发。DUB(Deubiquitinase,去泛素化酶)在Hippo信号通路的调控中具有非常重要的作用,而且DUB比较适合药物的研发。因此,
目的:探索血红素调节抑制素(HRI)对激素受体(HR)阳性,人表皮生长因子受体2(HER2)阴性,即HR+HER2-乳腺癌患者的预后预测作用;体内外实验验证其对乳腺癌细胞功能的影响。探索HRI在体内体外对HR+HER2-乳腺癌细胞他莫昔芬耐药的影响及其机制探索。方法:通过基因表达数据集(GEO)、癌症基因组图谱(TCGA)、国际乳腺癌协会分子分类数据库(METABRIC)、Kaplan-Meier