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禽巴氏杆菌病、禽大肠杆菌病一直是养禽业中常发生的原发或继发性细菌病,对养禽业造成不小的威胁和损失。为了研究探索安全、有效的新型疫苗,本室研究生连续进行了系列试验。
陈红英(2002)提取禽大肠杆菌O78、O2外膜蛋白,免疫试验结果表明,两血清型之间具有交互保护作用;
唐满华(2003)提取禽大肠杆菌O78、禽巴氏杆菌5∶A的外膜蛋白,免疫试验结果表明,两种细菌之间也具有一定的交互保护作用;
温纳相(2003)克隆鸡IL-18基因(cIL-18),构建其真核表达质粒pcDNA3.1/cIL-18;
曹素芳(2004)克隆了禽巴氏杆菌外膜蛋白H基因(ompH),构建了该基因与cIL-18基因真核共表达质粒pcDNA3.1/ompH-cIL-18,免疫试验结果表明,pcDNA3.1/ompH-cIL-18接种鸡获得了47%的近期保护率。
本研究在曹素芳(2004)研究的基础上,为进一步提高新型DNA疫苗pcDNA3.1/ompH-cIL-18的免疫效果,参考最近的一些研究报告,选取来源广、价廉的传统佐剂司苯-甘油和磷酸铝,试验探讨其对pcDNA3.1/ompH-cIL-18的佐剂效果。
试验在PCR、酶切鉴定重组质粒pcDNA3.1/ompH-cIL-18保存良好的基础上,大量制备该质粒,进行含量测定,分别加入佐剂磷酸铝和司苯-甘油,制备成佐剂核酸疫苗。按曹素芳(2004)免疫试验相同条件,将35日龄的鸡随机分为6组,分别注射禽巴氏杆菌活疫苗(1头份/只)+pcDNA3.1/cIL-18(200μg/只),磷酸铝+pcDNA3.1/ompH-cIL-18(100μg/只),司苯-甘油+pcDNA3.1/ompH-cIL-18(100μg/只),磷酸铝+pcDNA3.1/ompH-cIL-18(200μg/只),司苯-甘油+pcDNA3.1/ompH-cIL-18(200μg/只),生理盐水0.5mL。于49日龄按上述剂量进行二免。首免后,每周抽血,应用T淋巴细胞转化试验(MTT法)检测各免疫组鸡只外周血淋巴细胞转化效果、ELISA检测各免疫组抗体效价,64日龄各组分别进行禽巴氏杆菌强毒菌和禽大肠杆菌强毒菌攻击保护试验。
试验结果综合表明:1.本室构建的鸡IL-18基因重组真核表达质粒pcDNA3.1/oIL-18与禽巴氏杆菌弱毒菌苗联合免疫鸡,可使弱毒菌苗的近期免疫保护效果从76%提高至90%;2.传统佐剂磷酸铝与本室构建的禽巴氏杆菌外膜蛋白H基因与鸡IL-18基因真核共表达质粒pcDNA3.1/ompH-cIL-18,联合免疫鸡只,可使pcDNA3.1/ompH-cIL-18的近期免疫保护效果从47%提高至50%~60%;其免疫效果随pcDNA3.1/ompH-cIL-18的剂量增加而提高;磷酸铝的作用主要是提高DNA疫苗的体液免疫。3.司苯-甘油与pcDNA3.1/ompH-cIL-18联合免疫鸡只,可使pcDNA3.1/ompH-cIL-18的近期免疫保护效果从47%提高至60%~70%;pcDNA3.1/ompH-cIL-18的剂量,100μg/只反而比200μg/只好;司苯-甘油的作用既提高DNA疫苗的细胞免疫,又提高体液免疫。4.司苯-甘油+pcDNA3.1/ompH-cIL-18(100μg/只),经过二免,可使成年鸡既获得抗禽巴氏杆菌70%的保护率又可获得抗禽大肠杆菌40%的保护率,具有继续试验研究价值及应用前景。