【摘 要】
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为了了解广东省大肠杆菌O:H(Escherichia coli O:H,E.coli O:H)在猪粪便、牛粪便、屠宰场和市场肉制品的存在情况,自2002年8月至2003年8月从广州、深圳、东莞、韶关和南海等
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为了了解广东省大肠杆菌O<,157>:H<,7>(Escherichia coli O<,157>:H<,7>,E.coli O<,157>:H<,7>)在猪粪便、牛粪便、屠宰场和市场肉制品的存在情况,自2002年8月至2003年8月从广州、深圳、东莞、韶关和南海等地采集猪肉样品250份、猪粪便318份和牛粪便206份共774份样品,将样品放入新生霉素改良肠道杆菌增菌肉汤培养基中增菌18~24h,再将增菌液涂布于改良的山梨醇麦康凯(Sorbitol MacConkey Agar,CT-SMAC)培养基上进行E.coli O<,157>:H<,7>的分离,经血凝试验、生化鉴定以及聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)鉴定,从这些样品中分离出4株E.coli O<,157>:H<,7>.其中从猪粪中检出3株E.coli O<,157>:H<,7>,猪粪样品的检出率为0.94%(分别命名为03048、03511和03512);牛粪中检出1株(命名为021210),牛粪样品的检出率为0.48%.农贸市场的猪、牛肉样品及从各屠场采集的猪肉样品未检测到E.coli O<,157>:H<,7>.E.coli O<,157>:H<,7>总的分离率为0.52%.将分离菌株腹腔注射小白鼠进行毒力试验,结果各菌株毒力表现不同:菌株021210的死亡率为5/5,菌株03512的死亡率为4/5,菌株03048的死亡率为1/5,菌株03511的死亡率为0/5.PCR鉴定结果表明:菌株021210含有eae、slt-Ⅰ和slt-Ⅱ三种毒力基因,而菌株03048、03511和03512都只含有slt-Ⅰ一种毒力基因.毒力基因多少与小鼠死亡率具有一定的相关性.对4株E.coli O<,157>:H<,7>菌进行26种药物敏感性试验,结果表明各菌株都有比较强的耐药性.该文应用多重PCR技术从食品和粪便中快速检测E.coli O<,157>:H<,7>进行了研究.根据已发表的E.coli O<,157>:H<,7>的rfbE基因、fliC基因、eae基因、slt-Ⅰ基因和slt-Ⅱ基因分别自行设计了五对引物.利用设计的五对引物,通过对PCR反应的各引物浓度、Mg<2+>浓度、dNTP的浓度、退火温度和时间和循环次数的摸索,建立了五重PCR检测E.coli O<,157>:H<,7>的方法.该文系统地探索了五重PCR检测E.coli O<,157>:H<,7>的方法,对DNA模板的制备进行了改进,整个过程可在18个小时内完成,且具有很高的特异性、敏感性、重复性和稳定性.为快速检测E.coli O<,157>:H<,7>的PCR试剂盒的开发打下了基础.
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