α-氯丙酸（α-CPA）是多种除草剂和除虫剂的重要组成部分。这些农用化学品一贯以来就得到广泛使用。但是，α-氯丙酸具有光学活性，只有用（S）构型α-氯丙酸合成的农药才具有很高的生理活性或药理作用，而用（R）构型合成的农药活性很低或无活性，且可能以竞争性抑制剂的形式起作用。所以未经拆分的α-氯丙酸合成农药使用时，既无高活性，也加剧了环境的污染。为了解决这个问题，必须发展高效拆分α-氯丙酸消旋体的方法。利用仅作用于（R）构型底物的（R）-脱卤酶，将（R）-α-氯丙酸转化为（S）-乳酸，而将（S）-α-氯丙酸保留下来。这样，我们便获得了高效拆分氯丙酸的新方法。 首先从杭州农药厂的厌氧污泥中筛出对α-氯丙酸具有较高脱氯活性的菌株，并考察了它的脱氯反应情况和生长曲线。实验证明筛出菌所产酶为胞内组成酶。 考察了粗酶的酶学性质。发现pH7.5是该酶的最适反应pH值。在pH7.5下，酶的pH稳定性最高。结合酶活力和热稳定性的因素考虑，30℃为酶反应进行的最佳温度。对粗酶的动力学参数进行了研究，求得V_max为2.226×10^-4mol／min·L，米氏常数K_m为1.724×10^-3mol／L。 用正交实验法考察菌体培养的合适碳、氮加入量。当培养基中葡萄糖浓度为50g／L、酵母粉浓度为5g／L、（NH₄）₂SO₄浓度为1g／L时，可以获得较多的菌体和脱卤酶。对菌体的培养温度进行考察，结果30℃是菌体生长较适宜的温度。 采用扩张床吸附法纯化粗酶。确定进样液蛋白质浓度4.6mg／mL，洗脱液为0.25M的（NH₄）SO₄。经扩张床纯化后，脱卤酶的比活力提高了28倍，达到了4.722U／mg，同时回收率达到了68％。这些与文献报道的纯化方法相比都有了很大提高，而整个纯化过程大大简化。 最后，对经扩张床纯化后的酶液进行离子交换吸附，以得到单一的（R）-脱卤酶。采用（NH₄）₂SO₄阶梯洗脱。0.3M下洗脱的峰含有（R）-脱卤酶。实验验证这种（R）-脱卤酶对（R）-α-氯丙酸的脱氯反应具有较好的选择性。本文还对（R）-脱卤酶的酶学性质进行了考察。发现此酶的最适反应pH为7.5、最适反应温度为30℃。并且，酶的选择性不随pH和温度的改变而发生变化。浙江大学硕士学位论文 摘要 本文在国内首次建立了脱卤酶生产纯化以及用脱卤酶生产光活性①卜a一氯丙酸的方法，为进一步研究高效生物爬升a一氯两酸生产方法打下了良好基础。