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心肌细胞氧化性损伤是心血管系统结构和功能异常的重要原因之一。寻找及开发保护心肌细胞氧化损伤性的天然物质是防治心血管疾病的前提。蜂胶是一种天然的活性物质,具有多重生物学活性,如抗氧化、抗菌、抗炎、抗肿瘤等。本文从蜂胶中分离、筛选出了抗心肌细胞氧化损伤作用较强的活性物质以及研究了抗氧化作用机制,为心血管疾病的防治提供物质基础和理论依据。本文采用乙醇提取、层析分离、制备型高效液相色谱(HPLC)并结合液相-质谱联用(LC-MS),从蜂胶中分离、纯化并鉴定出6种化合物。以CCK-8法测得的H9c2心肌细胞存活率为指标确定了700μmol/L和4h为H2O2氧化损伤条件,筛选出了6种蜂胶中具有抗心肌细胞氧化损伤作用的活性物质,其中三种咖啡酸酯类物质咖啡酸苄酯、咖啡酸苯乙酯(CAPE)和咖啡酸肉桂酯的抗氧化活性高于两种黄酮类物质白杨素、短叶松素和一种酚酸类物质3,4-二甲氧基肉桂酸(DMCA)。以1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L为三个预处理浓度,分别从生化水平和分子水平研究了咖啡酸苄酯、CAPE和咖啡酸肉桂酯抗心肌细胞氧化性损伤的作用机制,采用相关试剂盒测定了超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量,离子比例/成像系统测定了胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)；Annexin V-FITC/PI双染法结合流式细胞仪测得了细胞凋亡率和半定量PCR (RT-PCR)法测定Bcl-2、Bax和半胱天冬酶-3(Caspase-3) mRNA表达水平。结果：(1)经H2O2诱导致损H9c2心肌细胞的MDA含量明显升高,SOD活力和GSH-Px活力明显降低,且与正常组细胞呈极显著差异(P<0.01)。分别用1、5和10μmpl/L的咖啡酸苄酯、CAPE、咖啡酸肉桂酯和5μmol/L的阳性对照槲皮素预处理12h后,再对心肌细胞进行氧化损伤处理。结果,各浓度的供试品以及阳性对照都不同程度地降低了MDA含量,升高了SOD和GSH-Px活力,且呈现剂量依赖性的作用。(2)H9c2心肌细胞氧化损伤后[Ca2+]i极显著高于正常组(P<0.01)。咖啡酸苄酯、CAPE和咖啡酸肉桂酯预处理后,[Ca2+]i呈现下降趋势,且随供试品浓度增大,下降程度越大。其中,各物质高浓度预处理后,[Ca2+]i仅为损伤组的约2/3。(3)经H202氧化损伤诱导H9c2心肌细胞凋亡,受损细胞中Bcl-2的mRNA表达水平下降,Bax和Caspase-3的mRNA表达水平增强。经咖啡酸苄酯、CAPE和咖啡酸肉桂酯干预后,Bcl-2的mRNA表达上调,Bax和Caspase-3的mRNA表达下调,说明咖啡酸苄酯、CAPE和咖啡酸肉桂酯有效抑制氧化损伤诱导的细胞凋亡。蜂胶中咖啡酸酯类物质(咖啡酸苄酯、CAPE和咖啡酸肉桂酯)与黄酮类物质(白杨素、短叶松素)一样均具有保护氧化损伤性心肌细胞的作用,其作用机制可能是通过保护抗氧化酶、抑制脂质过氧化反应、降低[Ca2+]i和改善细胞凋亡现象实现的。其抗凋亡作用可能是通过调控与凋亡相关基因的表达水平,如上调Bcl-2的mRNA表达水平,下调Bax和Caspase-3的mRNA表达实现的。