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目的:肿瘤细胞增殖快速,需要特殊的物质代谢、能量代谢满足其增殖需要。研究发现,不同于正常细胞主要依靠外源性获取血液循环中的脂肪酸,肿瘤细胞内90%的脂肪酸都依靠细胞内其他物质合成而来,且不受细胞内脂肪酸含量的调节。在肿瘤细胞中,固醇调节元件结合蛋白1(Sterol Regulatory Element Binding Protein,SREBP1)是参与脂肪酸合成的主要转录因子。目前发现SREBP1在多种恶性肿瘤组织中过度表达并参与脂肪酸合成相关基因的调控,如乳腺癌、直肠癌、肝癌、胰腺癌、子宫内膜癌,但在甲状腺癌领域尚未有研究涉及。甲状腺癌发病率约1.5%,其中乳头状甲状腺癌(PTC)比例高达95%。因此,本研究对SREBP1在PTC中的表达进行探索,并进一步探讨其功能及相关机制,期望为PTC的靶向治疗从脂肪酸代谢领域提供新的思路。同时,本研究也对SREBP1参与转录的脂肪酸合成相关基因ACLY(ATP citrate lyase,ATP-柠檬酸裂解酶)和ACCA(Propionyl coenzyme A carboxylase,丙二酰辅酶A羧化酶)在PTC中的表达情况进行了初步探索,丰富SREBP1的研究。研究方法:采用组织芯片技术和免疫组织化学染色方法检测95例PTC组织和28例癌旁正常甲状腺组织中SREBP1的蛋白表达及细胞定位情况;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测40对PTC癌和癌旁正常组织中SREBP1在m RNA层面上的表达情况;在细胞中采用蛋白免疫印迹方法(Western Blot)检测了四株甲状腺乳头状癌细胞系K1、IHH4、BCPAP、TPC-1和一株甲状腺细胞系Nthyori3-1中SREBP1蛋白的表达情况。接着对SREBP1表达较高的甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1和IHH4进行小干扰RNA(si RNA)转染,通过CCK-8、流式细胞术及Transwell实验分析si SREBP1对甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1和IHH4细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的生物学行为的影响,采用RT-PCR及Western Blot技术检测si SREBP1对ACLY、ACCA、FASN这三个脂肪酸合成相关的重要基因的m RNA及蛋白表达的直接影响,同时采用油红O染色技术评估si SREBP1对细胞内脂肪含量的间接作用。用m TOR抑制剂INK128处理甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1和IHH4,观察INK128对肿瘤细胞内SREBP1及其转录基因表达的影响,同时检测INK128对细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的生物学行为的影响及对脂肪含量的影响。此外,我们还检测了PTC组织及癌旁正常组织中ACLY和ACCA的表达情况,以期丰富SREBP1研究内容。结果:(1)在m RNA层面,SREBP1在PTC组织中的表达高于正常甲状腺组织,差异具有统计学意义(P<0.05);在蛋白层面,SREBP1蛋白细胞定位以胞浆和胞核为主,在PTC组织中的表达高于正常甲状腺组织,差异有统计学意义(P<0.05);(2)SREBP1在PTC组织中高表达,和较大的肿瘤直径(≥2 cm)、淋巴结转移、TNM分期较高(III期和IV期)以及甲状腺腺外侵袭相关(P<0.05);(3)与对照组相比,SREBP1 siRNA可减慢甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1和IHH4的细胞增殖速度,降低细胞的迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,同时降低细胞内脂肪酸合成相关基因ACLY、ACCA、FASN的表达并降低脂滴含量。(4)与不加药组相比,INK128处理后的甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1和IHH4中SREBP1表达及ACLY、ACCA、FASN的表达下降,细胞内甘油三酯含量减少,细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱(P<0.05),但细胞凋亡无明显影响(P>0.05)。(5)ACCA在PTC中的表达明显高于正常甲状腺(P<0.05),ACLY在两组间的表达无明显差异(P>0.05)。对PTC中ACCA蛋白组化得分情况联系临床资料后发现:ACCA在PTC组织中高表达,和较大的肿瘤直径(≥2 cm)、淋巴结转移、TNM高分期(III期和IV期)以及甲状腺腺外侵袭相关(P<0.05)。(6)分析SREBP1和ACCA在PTC组织中组化评分发现,二者表达呈正相关,存在统计学意义(P<0.05)。结论:(1)SREBP1在PTC组织中高表达,并参与肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学行为及细胞内脂肪酸合成;m TOR通路参与了PTC细胞中SREBP1的表达调控。(2)ACCA在PTC组织中高表达,与SREBP1表达存在相关性,为SREBP1调控脂肪酸合成途径提供了有力证据;ACLY在PTC组织中的表达无明显变化,猜想可能存在其他因素抑制了ACLY在PTC中的表达。