为了提高海南粗榧（Cephalotaxus mannii）悬浮细胞合成三尖杉酯类碱的产量及探究其合成途径,本研究选择诱导子冠菌素对C.mannii悬浮细胞进行处理,并与诱导子茉莉酸甲酯进行对照研究。在培养过程中,分别向培养液中添加不同浓度冠菌素（0.5、1.0、2.0μmol/L）和茉莉酸甲酯（50μmol/L）,通过测定悬浮培养过程中的生物量、细胞活力、糖耗情况、细胞形态以及6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合酶（DS）酶活,分别考察它们对海南粗榧悬浮细胞合成三尖杉酯类碱的影响。利用转录组分析,进一步探究冠菌素和茉莉酸甲酯对三尖杉酯类碱合成途径的影响,探明三尖杉酯类碱合成途径中的关键酶。最后,探究了由根癌农杆菌介导的p BI-121质粒转化至植物悬浮细胞中的条件,为后续研究相关酶转基因植物工程细胞的构建打下基础。1.冠菌素对产物合成和细胞生长的影响用1.0μmol/L冠菌素处理植物细胞时,获得的三尖杉酯类碱产量最高（6.75mg/L）,是对照（3.14 mg/L）的两倍。低浓度冠菌素（0.5、1.0μmol/L）在添加48h内能提高G6PDH和DS酶的活性,且有利于产物合成。冠菌素浓度超过2.0μmol/L时,对细胞生长有较强的抑制作用,并导致G6PDH和DS酶活力下降。冠菌素（1.0μmol/L）与茉莉酸甲酯（50μmol/L）均能促进三尖杉酯类碱的合成,但冠菌素的效果更好,对细胞的抑制作用小,因此冠菌素比茉莉酸甲酯能更好地促进海南粗榧细胞内的三尖杉酯碱合成。2.转录组与代谢途径分析转录组分析发现三尖杉酯类碱合成涉及到的戊糖代谢途径、莽草酸途径、氨基酸合成等途径。诱导子影响其中一些关键酶如DS、PAL、G6PDH、己糖激酶以及二萜合酶等酶基因的转录水平。茉莉酸甲酯处理组与对照组相比,DS酶基因转录上调3.1倍,PAL酶基因转录上调4.53倍;冠菌素处理组与对照组相比,二萜合酶基因转录上调2.79倍,己糖激酶基因转录水平上调2.86倍;在冠菌素处理24 h和48 h的对比中,24 h时DS上调2.79倍,PAL上调7.01倍;在茉莉酸甲酯和冠菌素联用处理24 h和48 h两组的对比中,DS、PAL、G6PDH与二萜合酶都在24 h时高表达。3.根癌农杆菌介导的p BI-121质粒转化条件的探索将p BI-121质粒转入根癌农杆菌EHA105和LBA4404细胞中,然后以海南粗榧悬浮细胞为外植体,进行农杆菌EHA105和LBA4404的转化。转化条件为:20 m L海南粗榧悬浮培养细胞与10 m L根癌农杆菌LBA4404(OD600=0.8)在23℃,50 r/min下共培养24 h。以100μg/m L卡那霉素和300μg/m L头孢菌素对共培养物进行杀菌。转化后海南粗榧细胞细胞中有300 bp左右的标记基因带,因此可以判断质粒成功转入。