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COP9信号复合体(Constitutiv.Photomorphogeni.signalosom.CSN)是近年来备受关注的保守蛋白复合体,含有八个亚单位,其中第五亚基CSN5/JAB1在各物种中保守性最高,且内嵌有CSN的功能位点-JAMM基序。CSN以其异构酶活性参与蛋白的泛素化降解途径,调控细胞周期运转及生物体的生长发育过程。在对本实验室五龄幼虫的cDNA库进行检索中,发现一条长度为1227bp的基因,预测其编码的蛋白有349个氨基酸残基,相对分子量38 kDa,经NCBI比对发现,预测编码的蛋白具有完整的JAB-MPN保守结构域,与COP9信号复合体具有较高的同源性,将其命名为BmJM。将此基因插入到融合表达载体pET-28a(+)的多克隆位点,经PCR,双酶切鉴定重组质粒构建成功后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta中,IPTG终浓度0 mM-.mM,25-37℃均表达成功,但表达的重组蛋白都以包涵体形式存在。经过溶解液洗涤,将含有目的蛋白的上清经镍柱亲和层析和反相柱层析纯化后,以纯化的重组蛋白为抗原免疫大白兔获得该蛋白的多克隆抗体,经ELISA检测,抗体效价可达1:25600以上。提取家蚕各个时期和组织的天然蛋白和总RNA,利用荧光定量PCR技术以及荧光Wester.blotting技术,分析BmJM基因在家蚕发育过程中不同时期及五龄幼虫各组织中的转录、表达情况。结果显示该基因mRNA在家蚕发育各时期的表达量由高到低依次为蛾、蛹、幼虫、卵,说明CSN伴随着家蚕发育的完善,作用逐步显现。在五龄幼虫各组织中,性腺和头部有着较多的BmJM蛋白表达量,在气门、脂肪体中则没有检测到该蛋白的存在,很可能表明CSN调控生物体的增殖发育过程。同时,以该抗体联合免疫荧光标记对家蚕Bm5细胞进行亚细胞定位,发现BmJM蛋白在细胞质和细胞核内均有分布,主要定位于近核区域。这些实验数据不仅证明了COP9信号复合体在家蚕中的存在,也为CSN在调控家蚕生长发育过程中的重要作用提供了证据。