心里美萝卜色素合成规律研究及萝卜花青素调节基因的克隆

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中国萝卜(Raphanus sativus L.var. longgpinnatus Bailey)品种资源极为丰富,经过长期的自然和人工选择,形成了不同的类型和众多的萝卜品种。按照食用习惯的不同,可划分为南方地区的白皮萝卜、北方地区的绿皮萝卜和南北方均有的红皮萝卜。而北方地区特有的心里美萝卜则形成相对较晚,何启伟等(1997)研究证实心里美萝卜是杂交起源,即由绿皮萝卜与红皮萝卜自然杂交、经长期自然和人工选择而来。传统的心里美萝卜作为水果萝卜食用,有悠久的历史,但心里美萝卜的风味淡、水分多,口尝品质及生化指标也远不如绿皮优质生食萝卜,而且,一直以来只有绿皮绿肉类型的心理美萝卜,南方广泛食用的辣味极轻的白皮及红皮萝卜均没有心理美类型,因此探明心理美萝卜色素合成规律及遗传规律,不仅可以利用现有优质绿皮萝卜与心里美萝卜杂交提高心里美萝卜的品质,选出肉质色既美又具优质绿萝卜风味的新型心里美萝卜。而且,可以将心里美红色素基因转到白皮白肉、红皮白肉类型萝卜中,创新萝卜种质,或直接利用红色愈伤组织工厂化生产天然红色素。本试验从心里美萝卜生长过程中色素合成规律入手,研究了不同部位色素合成与PAL、PPO、酪氨酸酶及可溶性糖含量的关系、萝卜高效再生体系的建立,并克隆了红色素调控基因,主要研究结果如下:以绿皮红肉、紫红皮红肉、红皮白肉和绿皮绿肉的不同秋冬萝卜品种为试材,研究了萝卜生长过程中色素形成的规律,以及心里美萝卜花青素形成与苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)和酪氨酸酶活性及可溶性糖含量的关系。结果表明,种子萌芽后即开始花青素合成,花青素首先在初生木质部大量合成,生长点分生组织花青素合成活跃;在衰老和成熟组织中叶绿素含量下降的同时花青素含量上升,而在迅速生长期叶绿素含量与花青素含量同时增长;无论是叶绿素、叶黄素还是花青素,均在萝卜破肚期含量最高。花青素含量较高的天正紫玉中叶绿素含量也很高;肉质中花青素合成在迅速生长期有一低谷,后期迅速升高。初步证实肉质根皮部和肉质中花青素合成由不同基因控制,可独立遗传;花青素合成与PAL呈显著正相关,与可溶性糖含量成正相关,PAL可能是控制心里美萝卜花青素合成的一个关键酶。减弱光照和摘除功能叶影响花青素的合成,同时影响PAL活性及可溶性糖的合成,而环剥对肉质根肉质花青素含量无显著影响。采用培养基MS无机盐+改良有机成分+BA 5mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1+0.9%琼脂+2%蔗糖,分别接种绿宝、满堂红、翘头青和秋果外植体,结果表明,不同基因型对萝卜不定
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