论文部分内容阅读
背景:肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TNF-like weak inducer of apop- ptosis,TWEAK)是肿瘤坏死因子配体超家族的新成员,按被发现的时间先后也称为第十二成员(TNF-superfamily member 12,TNFSF12),现发现其具有广泛的生物学活性,在多个系统的疾病发病机制中起着重要作用。骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种最常见的关节疾病和分布最广泛的慢性疾病之一,而关节软骨的破坏是OA的标志性特征。虽然确切的发病机制目前尚不明确,但目前已清楚的是,OA关节软骨的降解是通过多种的细胞因子介导的,如多种基质金属蛋白酶(MMPs)以及其他一些细胞激活后的产物。研究发现,TWEAK能诱导多种细胞分泌促炎症细胞因子和趋化因子及高表达MMPs和RANTES。目前国内外有关TWEAK对OA软骨细胞的作用及其信号传导研究较少。本研究旨在通过对骨关节炎软骨细胞的体外培养及其相关研究,探讨TWEAK参与骨关节炎关节软骨破坏的可能机制,进而寻求治疗OA的新方法。目的:1建立软骨细胞体外培养体系;2观察TWEAK分子在软骨细胞的表达情况;3研究TWEAK在不同浓度下诱导体外培养的骨关节炎软骨细胞合成MMP-9的影响;4观察TNF-α和IL-1β对TWEAK诱导软骨细胞合成MMP-9的影响。1收集行关节置换的骨关节炎患者关节软骨组织,用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶顺序消化法分离培养原代软骨细胞;2制作细胞爬片,应用免疫荧光法检测TWEAK分子的表达;3将rhTWEAK与软骨细胞共培育(其中协同作用组分别加入TNF-α和IL-1β),应用ELISA法检测刺激后培养液中MMP-9的水平;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测软骨细胞中MMP-9 mRNA的表达水平。结果:1总共收集到42例符合标准的骨关节炎关节软骨标本,成功培养并传代的有30例,总成活率为71.4%;2 TWEAK在OA软骨细胞中广泛表达,且主要定位于细胞浆;3当TWEAK终浓度为50、100μg/L时,其诱导OA软骨细胞合成MMP-9的水平明显高于对照组,具有显著的统计学意义(p<0.05);TWEAK终浓度为100μg/L时,其诱导OA软骨细胞MMP-9 mRNA的表达水平为对照组的1.28倍,具有显著的统计学意义(p<0.05)。4与单用TWEAK组比较,TNF-α和IL-1β协同作用组诱导软骨细胞合成MMP-9的水平明显高于对照组,具有显著的统计学意义(p<0.05),而协同作用组之间无统计学意义。结论:1应用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶顺序消化法分离培养软骨细胞是一种可行的软骨细胞原代培养方法,与国内外的报道相一致;2 TWEAK在OA软骨细胞中广泛表达且主要定位于细胞浆中;3 TWEAK通过诱导OA软骨细胞合成MMP-9,直接参与OA关节软骨的破坏,从而在OA的发病中起作用。方法:4 TNF-α和/或IL-1β在TWEAK诱导OA软骨细胞合成MMP-9的过程中起协同作用。