[背景和目的]　　胰腺癌(Pancreatic carcinoma)是临床上常见的消化系统恶性肿瘤。近年来,在世界范围内,其发病率呈现出明显上升的趋势。在欧美等工业发达国家,胰腺癌已是死亡率高居第4位的常见恶性肿瘤,而在我国由于人口老龄化、生活和饮食习惯的改变、环境污染等诸多原因,我国胰腺癌的发病率也呈现上升的趋势。肿瘤的常规治疗方式有手术、放射治疗、化学治疗。但由于该病发病部位隐蔽、早期无特异性体征、高度的侵袭性和进展性,大多数患者在确诊时已达局部晚期或发生远处转移,而且即使是早期发现、早期实施切除手术的原发肿瘤患者,相当一部分也会由于手术切除不彻底而发生局部复发或手术切除前已经出现了微转移。2007年美国预期有37,170新发病患者,估计其死亡人数与发病人数相当(33,370),即绝大部分的患者在确诊不到一年的时间内死去。目前,针对已经转移的晚期患者的常规治疗手段是化疗,而作为全身治疗方式的化学治疗,无论从毒副作用、病人生活质量、生存期来看,效果都不尽如人意。考虑到该病发病的普遍性和高死亡率,因此,探索新的、有效的预防及治疗方法显得十分迫切。　　无论是许多临床前细胞、动物模型研究,还是临床实验研究,均已证实干扰素-γ(IFNγ)具有直接抑制肿瘤细胞的增殖、免疫调节和抑制肿瘤血管生成等诸多抗癌活性。但是由于静脉注射重组IFNγ蛋白的体内半衰期短(仅几分钟),大剂量反复给药系统毒性大,因此限制了其临床应用。　　肿瘤生物治疗(Biotherapy)包括免疫治疗和基因治疗,是上世纪80年代发展起来的建立在“改变宿主对肿瘤细胞的生物学反应而起到抗肿瘤的效果”。这种方法挟现代分子生物学和免疫学迅猛发展之势,已被认为是继肿瘤外科、放疗、化疗三大常规治疗方式之后肿瘤综合治疗中的第四种模式,越来越受到重视。　　本研究采用重组的腺病毒作为基因治疗的载体,利用病毒感染肿瘤细胞使目的基因人干扰素γ基因导入肿瘤细胞,通过借助肿瘤细胞的蛋白合成系统,将肿瘤细胞作为药物合成的“工厂”持续合成分泌具有治疗作用的IFNγ,可以避免静脉注射重组蛋白的半衰期短、反复给药、毒副作用大等缺点,从而达到更好的治疗效果。除了探讨携带 IFNγ的腺病毒(Ad- IFNγ)在胰腺癌中的治疗作用,还初步研究其可能的作用机制,并检测其与近年来治疗胰腺癌的一线药物吉西他滨(gemcitabine)联合用药是否存在叠加或协同的治疗效果。　　[材料和方法]　　利用HEK293细胞扩增携带IFNγ的腺病毒,通过氯化铯密度梯度纯化病毒,以PCR鉴定纯化的腺病毒,确定其含治疗基因、无野生型腺病毒(wt-Ad)、腺相关病毒(AAV)污染后,感染体外培养胰腺癌细胞株 Capan-2,体外不同时间检测基因蛋白表达情况以及抗增殖效果、对细胞凋亡的影响;通过建立裸鼠皮下移植瘤模型,检测瘤内注射抑瘤效果,并通过ELISA检测荷瘤小鼠IFNγ组织动态分布情况、RT-PCR半定量检测肿瘤组织中IFNγ基因表达、取肿瘤组织切片进行 HE染色、免疫组化检测组织细胞增殖(Ki-67)、评价组织的凋亡(TUNEL)情况。　　[结果]　　Ad- IFNγ感染细胞后能高效持续表达蛋白IFNγ,抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡。体内实验表明:瘤内注射重组腺病毒可以抑制肿瘤生长;RT-PCR从转录水平、ELISA从蛋白水平证明治疗基因产物IFNγ可以在肿瘤组织持续表达高达一周。酶联免疫(ELISA)检测显示基因产物IFNγ主要分布在肿瘤组织中,其次是肝脏和血液中而其它脏器分布较少,在治疗过程中小鼠未见明显的系统毒副作用;Ad-IFNγ处理组小鼠的移植肿瘤与对照组相比明显小于对照组(PBS组和Ad-LacZ组),与Ad-LacZ组相比抑瘤率为42.56％±8.50%,而和PBS组相比抑瘤率为47.80%±8.96%。组织切片HE染色证明注射Ad- IFNγ的肿瘤组织坏死明显;免疫组化检测Ki-67,发现治疗组肿瘤的Ki-67表达减少,而TUNEL检测发现治疗组与对照组相比凋亡明显(P<0.05)。小鼠体内荷瘤实验表明,注射Ad-IFNγ与低浓度的化疗药联合应用可以增强抗肿瘤的效果,同时避免了大剂量化疗药物对小鼠的毒副作用。　　[结论]　　瘤内注射Ad-IFNγ在临床应用中具有治疗开发应用价值。这种方法可以有效地抑制胰腺肿瘤细胞 Capan-2的增殖,诱导其凋亡。Ad-IFNγ和治疗胰腺癌的一线药物gemcitabine联合应用,可产生更有效的抑瘤效果,能更有效地抑制肿瘤的生长。它们可能组成一个治疗胰腺癌的更有效方案。