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背景:肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌约占80%。表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)(如吉非替尼、厄洛替尼)是治疗含有EGFR敏感突变的晚期非小细胞肺癌(none-small-cell lung cancer,NSCLC)的重要手段,但几乎所有治疗有效的患者最终都会对TKI治疗产生获得性耐药。目前研究证实miRNAs和EGFR-TKI耐药相关。此外,我们前期研究发现,Micro RNA-1(miR-1)可以通过负性调控靶基因磷脂酰肌醇-3激酶催化亚单位α(phosphoinositide-3-kinase catalytic subunite alpha,PIK3CA),从而抑制肺癌细胞株的增殖、迁移及侵袭。然而,关于miR-1是否调节TKI获得性耐药及调节机制尚不明确。第一部分 培美曲塞或培美曲塞联合铂类间插EGFR-TKI治疗TKI耐药的非小细胞肺癌患者回顾性研究目的:评价经EGFR-TKI治疗获得性耐药的肺癌患者,予以培美曲塞或培美曲塞联合铂类化疗间插TKI治疗,再以TKI维持治疗的疗效和安全性。方法:筛选42名对EGFR-TKI治疗有效时间超过6个月后发展为TKI获得性耐药的NSCLC患者予以培美曲塞或培美曲塞联合铂类方案化疗,在化疗期间平均第8到第21天间插TKI治疗,以21天为一个治疗周期,化疗2-4个周期后患者继续服用TKI维持治疗,直至无法耐受的毒性或病情进展停药。主要观察终点为中位无进展生存时间(median Progression-free survival,m PFS),次要观察终点为疾病控制率(Disease Control Rate,DCR)和不良事件(adverse events,AEs)。结果:本研究主要的观察终点mPFS为8.0个月,次要观察终点DCR为78.6%且患者可耐受该治疗方案。仅2例患者因不可耐受的毒性终止治疗。3/4级的血液毒性包括中性粒细胞减少(23.8%)、白细胞减少(16.7%)、贫血(4.8%)和血小板减少症(4.8%)。常见的3级非血液学毒性包括恶心(7.1%)、呕吐(9.5%)、厌食(11.9%)、皮疹(7.1%)、乏力(9.5%)、感染(16.7%)和口腔黏膜炎(2.4%)。没有发生毒性相关性死亡。结论:EGFR-TKI获得性耐药患者在TKI耐药后予以培美曲塞或培美曲塞联合铂类间插TKI方案治疗后,再以TKI维持治疗的疗效尚可,患者可耐受。第二部分 miR-1通过抑制靶基因PIK3CA增强肺癌耐药细胞株对EGFR-TKI敏感性的研究目的:探讨miR-1在EGFR-TKI肺癌耐药细胞和敏感细胞中的作用,进一步阐述肺癌EGFR-TKI耐药细胞恢复对TKI敏感性的机制。方法:将miR-1的模拟物(mimics,mm)和抑制物(inhibitor,inh)瞬时转染PC9肺腺癌敏感细胞株及PC9G肺腺癌耐药细胞株,使其过表达或低表达。利用实时定量PCR(Real-time Quantitative,RT-PCR)检测miR-1、PIK3CA的表达水平。采用Western Blot法检测PIK3CA及下游信号通路分子蛋白表达改变。通过Transwell实验检测PC9及PC9G细胞的迁移转移性的改变。采用CCK8试剂盒检测两种肺腺癌细胞的IC50变化。采用流式细胞计数仪检测细胞周期和凋亡的变化。结果:RT-PCR结果显示miR-1在PC9中高表达,PC9G中低表达,而PIK3CA表达水平无显著差异。Western blot结果显示转染miR-1 mm的PC9G细胞中PIK3CA、Akt、Survivin蛋白表达降低;而转染miR-1 inh的PC9细胞中PIK3CA、Akt、Survivin蛋白表达升高。在PC9G细胞中过表达miR-1后耐药细胞对吉非替尼敏感性增强,迁移能力受到抑制,促进细胞周期阻滞但对细胞凋亡能力影响不大。结论:我们研究发现miR-1可能通过调控靶基因PIK3CA的表达,抑制PIK3CA/Akt/Survivin信号通路的激活从而抑制了TKI耐药细胞的增殖及迁移,恢复PC9G细胞对TKI的敏感性。以miR-1模拟物/PIK3CA抑制剂为基础的治疗方案有望增强肺癌耐药细胞对TKI的敏感性,从而有望成为逆转非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药新手段。