目的：制备兔抗人细胞色素P450 3A4(CYP3A4)多克隆抗体(pAb),并对其特性进行鉴定。 方法：利用生物信息学方法分析CYP3A4蛋白的序列,根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择多肽序列,合成CYP3A4多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,免疫日本大耳白兔制备抗CYP3A4抗体。辛酸-硫酸铵法纯化抗体,间接ELISA法测定抗体的效价及相对亲和力常数,Western blot鉴定pAb特异性,免疫组化进行细胞定位。 结果：获得针对小分子CYP3A4的抗体。该抗体效价为1:16 000;相对亲和力常数在105～106M-1,具有实用价值。Western blot分析显示,可与CYP3A4合成肽及天然CYP3A4出现特异性反应；该抗体识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为46 000。免疫组化染色显示,该pAb可与正常人肝细胞胞浆中的CYP3A4蛋白结合(CYP3A4主要分布在内质网和线粒体内膜,而二者位于胞浆中)。 结论：合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP3A4合成肽抗体可应用于酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫组化实验。