拟南芥抗菌核病突变体筛选及转GO基因油菜表达研究

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yan8108
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核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum ( Lib.) de Bary]是一种广谱性病原真菌,能危害75科450多种植物。在我国,S.sclerotiorum在大豆、油菜、向日葵和十字花科蔬菜上引起严重的菌核病,造成巨大的经济损失。研究表明,草酸毒素在S. sclerotiorum致病过程中起关键作用。遗憾的是,人们至今尚未发现对S. sclerotiorum免疫的或有效的天然抗源。本研究在建立了拟南芥抗菌核病筛选方法的基础上,筛选了51 600株雌激素诱导激活型拟南芥T-DNA插入突变体,其中5 000株采用菌丝体直接接种筛选法,筛选出抗感差异明显的个体;其余46 600株采用菌核病毒素草酸-病菌接种两步筛选法,即先用2 mmol/L草酸在MS培养基上筛选,存活的植株经PCR验证,阳性植株移栽培养15 d后,再用菌丝体接种鉴定,筛选出2株对菌核病高抗的突变体,这2株为功能缺失型突变体。另外,本试验还采用转葡萄糖氧化酶基因(GO)油菜和非转基因油菜为材料,利用半定量RT-PCR技术研究转GO油菜和非转基因油菜以及它们分别接种菌核病病原菌72h后的防御基因的差异表达。结果发现,在转GO基因油菜株系中,PR-1比非转基因油菜有明显的上调表达;接种菌核病后,无论在非转基因植株或转基因植株中,防御相关基因PDF1.2、NPR1、PR-1的表达量都比非转基因非接菌对照高,推测可能是外源GO转入油菜后,首先为油菜提供了一定的防御潜能,当接菌后使这些潜能释放,激发其它防御的途径。但这种机制有待进一步实验证明。
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