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【目的】通过体外实验研究Rb/E2F1信号通路在B[a]P致神经元凋亡中的作用。【方法】1建立体外染毒模型:选取新生1-3天的SD大鼠,用神经基础培养基(98%Neurobasal-A无血清培养基+2%B27培养基添加剂+0.5mmol/L L-谷氨酰胺)培养皮质神经元,培养五天之后用于实验,以B[a]P同时加入S9混合液对细胞染毒,染毒终浓度分别为0.5μmol/L B[a]P,1μmol/L B[a]P,2μmol/L B[a]P,同时设立空白对照组、DMSO溶剂对照组、S9混合液对照组、抑制剂(Roscovitine,Ros)对照组、2μmol/L B[a]P+Ros组,染毒五天后处理细胞。2CCK-8法检测细胞活力,Annexin-V/PI双染法检测细胞的凋亡率。3Western-blot法检测皮质神经元Rb/E2F1通路上相关蛋白CDK5、Rb、p-Rb[Ser780]、p-Rb[Ser807/811]、E2F1、P53表达情况。【结果】1CCK-8法检测结果显示,各染毒组随B[a]P染毒剂量增高皮质神经元的活力逐渐下降,与空白对照组相比较活力分别下降了14.84%,23.75%,44.48%。2μmol/L B[a]P+Ros组与2μmol/L B[a]P组相比较活力上升了0.26倍。2Annexin-V/PI双染法检测结果显示,染毒浓度增高,神经元凋亡率随之增高。0.5μmol/LB[a]P、1μmol/L B[a]P、2μmol/L B[a]P染毒组神经元凋亡率与各对照组相比较有统计学差异,各组神经元凋亡率与空白对照组相比较分别增加了3.45倍、6.79倍、13.33倍。2μmol/L B[a]P+Ros组神经元凋亡率与2μmol/L B[a]P组相比较下降了42.66%。3免疫印迹对细胞周期相关蛋白的检测结果显示,随染毒剂量增高各蛋白表达呈上升趋势。1μmol/L B[a]P、2μmol/L B[a]P染毒组Rb蛋白的表达量与各对照组Rb蛋白的表达量相比较具有统计学意义,两组分别与空白对照组相比,Rb蛋白的表达量分别增加了0.67倍、1.83倍。2μmol/L B[a]P+Ros组Rb蛋白的表达量与2μmol/L B[a]P组相比较下降了34.03%。1μmol/L B[a]P、2μmol/L B[a]P染毒组Rb蛋白的Ser780位点磷酸化蛋白的表达量与各对照组、0.5μmol/L B[a]P组相比较差别有统计学意义,两组分别与空白对照组相比较Ser780位点磷酸化蛋白的表达量分别增加了0.51倍、0.62倍。2μmol/L B[a]P+Ros组Ser780位点磷酸化蛋白的表达量与2μmol/L B[a]P组相比较下降了16.85%。1μmol/LB[a]P、2μmol/LB[a]P染毒组Rb蛋白的Ser807/811位点磷酸化蛋白的表达量与各对照组相比较有统计学差异,两组分别与空白对照组相比较Ser807/811位点磷酸化蛋白的表达量分别增加了0.48倍、0.54倍。2μmol/L B[a]P+Ros组Ser807/811位点磷酸化蛋白的表达量与2μmol/L B[a]P组相比较下降了3.61%。0.5μmol/L B[a]P、1μmol/L B[a]P、2μmol/L B[a]P染毒组E2F1蛋白表达量与各对照组相比较有统计学差异,各组E2F1蛋白表达量分别与空白对照组相比较分别增加了0.49倍、0.62倍、0.98倍。2μmol/L B[a]P+Ros组E2F1蛋白表达量与2μmol/L B[a]P组相比较下降了23.21%。4免疫印迹法检测CDK5蛋白表达结果显示,1μmol/L B[a]P、2μmol/L B[a]P染毒组CDK5蛋白的表达量与各对照组相比较有统计学差异,两组CDK5蛋白的表达量与空白对照组相比较分别增加了0.58倍、1.19倍。5免疫印迹法检测P53蛋白表达结果显示,0.5μmol/L B[a]P、1μmol/L B[a]P、2μmol/LB[a]P染毒组P53蛋白表达量与各对照组相比较有统计学差异,各组P53蛋白表达量分别与空白对照组相比较分别增加了0.93倍、0.98倍、1.38倍。2μmol/L B[a]P+Ros组P53蛋白表达量与2μmol/L B[a]P组相比较下降了20%。【结论】1苯并[a]芘可降低皮质神经元的活力,诱导神经元周期重启从而导致皮质神经元凋亡。2苯并[a]芘可以通过CDK5重启周期,进而通过Rb/E2F1-P53通路诱导神经元凋亡。3CDK5的特异性抑制剂ROS对苯并[a]芘诱导的神经元凋亡有保护作用。