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目的:研究转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor--β1,TGF-β1)通路相关调节蛋白及通路直接产物,整合素αvβ8、p38、细胞外调节蛋白激酶2(Extracellular Regulated Protein Kinases 2,ERK2)、c-Jun氨基末端激酶2(c-Jun N-terminal kinase,JNK2)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(Tissue Inhibitor Of Metalloproteinase 1,TIMP-1)及CollagenⅢ蛋白在胆道闭锁(Biliary Atresia,BA)患儿肝脏中的表达情况,同时研究以上六种蛋白在BA肝纤维化过程中的作用机制。方法:选取天津市儿童医院普外科2014年4月-2016年4月收治的BA患儿做Kasai手术时的肝组织20例为BA组,胆管扩张症患儿术中做肝活检的肝组织标本20例为胆扩组;天津市第一中心医院小儿器官移植科BA患儿行Kasai手术后因肝功能衰竭等相关原因进行肝移植时的肝组织标本20例为肝移植组。上述肝组织均取自患儿肝右叶前缘,对肝脏组织分别行HE染色、相关抗体免疫组织化学染色及实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验。通过HE染色主要是观察肝组织中肝细胞结构改变及炎性细胞的分布情况;免疫组织化学染色检测肝内αvβ8、p38、ERK2、JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ在肝组织中的表达情况及组织定位;qRT-PCR方法检测肝组织中以上各种蛋白因子在基因水平的表达情况。应用SPSS 17.0软件以及图像分析软件(Image-Pro-Plus,IPP)对以上各种蛋白因子进行图像及统计学分析,分析其在胆扩组、BA组及肝移植组中的表达差异性,最后探讨其在肝纤维化过程中的作用机制。结果:1、HE染色。胆扩组可偶见少许纤维细胞增生,少量炎症细胞浸润;BA组汇管区增宽,大量炎症细胞浸润,纤维组织增生明显、桥接纤维化现象普遍,可见假小叶形成;移植组汇管区明显增宽,纤维组织增生严重,有广泛桥接纤维组织形成,假小叶显著,见瘢痕组织形成。2、免疫组化。(1)免疫组化定性分析:这些蛋白主要阳性部位为:肝细胞胞质、汇管区胆管上皮细胞及血管内皮细胞胞质。1)αvβ8蛋白。在胆扩组αvβ8蛋白在肝细胞胞质、汇管区血管内皮细胞胞质以及胆管上皮细胞胞质中均着色,呈弱阳性表达,而在BA组和肝移植组肝细胞胞质、汇管区胆管上皮细胞及血管内皮细胞胞质则呈强阳性表达。2)p38蛋白。在肝细胞胞膜、汇管区胆管上皮细胞胞质、血管内皮细胞胞质上着色阳性。在胆扩组中以上细胞呈阴性表达,而在Kasai组和肝移植组中的肝细胞胞质、汇管区血管内皮细胞胞质、胆管上皮细胞胞质中强阳性表达。3)ERK2蛋白。胆扩组只在肝窦周围细胞、血管内皮细胞胞质中弱阳性表达,而在BA组及肝移植组除了在血管内皮细胞、肝窦周围细胞胞质中强阳性表达之外,还在胆管上皮细胞及肝细胞胞质中表达也呈强阳性。4)JNK2蛋白。在3组肝组织中,JNK2蛋白在肝细胞胞质、汇管区胆管上皮细胞和血管内皮细胞胞质中均有阳性表达,在胆扩组表达呈弱阳性,而在BA组及肝移植组则为阳性表达。5)TIMP-1蛋白。该蛋白在肝脏中的阳性表达位置为肝细胞细胞质、汇管区血管内皮细胞胞质以及胆管上皮细胞胞质。在胆扩组在以上细胞中均呈弱阳性表达,在BA组和肝移植组肝组织标本中则呈阳性表达。6)CollagenⅢ蛋白。在胆扩组,肝组织标本中在血管内皮细胞、胆管上皮细胞及肝细胞胞质中呈弱阳性表达,而在BA组和肝移植组中血管内皮细胞、肝细胞以及胆管上皮细胞胞质中阳性表达。(2)免疫组化半定量分析:在3组中,BA组及肝移植组αvβ8、p38、ERK2、JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ表达含量明显高于胆扩组(p<0.05)。而以上六种蛋白含量,移植组及BA组表达差异性在统计学上无意义(p>0.05)。3、qRT-PCR。在BA组及移植组2组肝内αvβ8、p38、ERK2、JNK2、TIMP-1及CollagenⅢmRNA含量比胆扩组高(P<0.017)。但在BA及肝移植组内其表达无明显统计学差异(P>0.05)。结论:在胆道闭锁患儿中,随着疾病的进展,肝纤维化程度的加重,αvβ8、p38、ERK2、JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ蛋白在BA肝组织中表达明显增高,表明αvβ8、p38、ERK2、JNK2、TIMP-1及CollagenⅢ蛋白可能参与并促进BA肝纤维进程。