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目的
探讨凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)与波形蛋白(vimentin,VIM)的表达与骨肉瘤患者的年龄、性别、病程分级、肿瘤的体积、分化程度、肿瘤的转移之间的关系,其中以“AIF/VIM两者之间的相互关系”以及“两种因子与肿瘤的分级转移之间的相关关系”为研究重点。
方法
标本取自1990年1月至2010年1月在中国医科大学附属盛京医院骨科活检及手术切除的组织共75例,其中骨肉瘤45例,骨软骨瘤标本30例。所有患者术前未行放、化疗。骨肉瘤患者,年龄12~73岁,中位年龄33.2岁,平均38.2岁;其中低度恶性,组织分化中等的G1期骨肉瘤标本15例,高度恶性组织分化差的G2期骨肉瘤标本30例,所有病例术前均未化疗跟放疗。取良性的骨软骨瘤30例作为对照观察。
采用链霉素亲生物素-过氧化物酶免疫组织化学技术(SP法)作VIM和AIF抗原检测,用已知的AIF和VIN抗原阳性的宫颈癌癌组织作为阳性对照,用PBS代替一抗作为阴性对照。石蜡切片经脱蜡和水化后,对组织抗原进行修复;每张切片加2滴过氧化酶阻断溶液,室温下孵育10min;后加一滴正常非免疫动物血清,室温下孵育10min;除去血清,切片分别滴加抗AIF抗体、抗VIM抗体,4℃过夜;每张切片加一滴生物素标记的二抗,室温下孵育10min;然后加一滴链霉素菌抗生物素2过氧化物酶溶液,室温下孵育10min(以上各步间均以PBS充分振洗);滴加新鲜配制的DAB显色液,室温5min,PBS冲洗中止显色反应,苏木精衬染,逐级乙醇脱水后二甲苯透明,中性树胶封片。
应用微波SP-免疫组化法,检测45例骨肉瘤组织中的AIF和VIM的表达水平,根据染色强度及显色肿瘤细胞比例将染色结果分为“-,+,++"3级:①按切片中细胞显色有无及深浅。评分:无显色为0分,棕黄色为1分,棕褐色为2分。②根据显色肿瘤细胞的比例记分:<30%为1分;31%~71%为2分;>71%为3分。每例肿瘤的积分=①+②,按积分高低分为:0分为阴性(-),1~3分为弱阳性(+),4~6分为强阳性(++)。统计学处理采用X2检验相关分析。
结果
45例骨肉瘤组织中AIF和VIM在骨肉瘤细胞中表达阳性率分别为66.70%(30/45)和73.81%(33/45),AIF与VIM在骨软骨瘤组织中低表达;AIF和VIM在骨肉瘤组织中表达无显著相关性(P>0.05):AIF与VIM在骨肉瘤中的表达与性别、年龄、病程、肿瘤体积、分化程度无关(P>0.05)。AIF的表达与骨肉瘤瘤的转移无关(P>0.05),VIM的表达与骨肉瘤的转移相关(P<0.05)。波形蛋白(VIM)与骨肉瘤的转移相关,是评价骨肉瘤转移的重要指标;凋亡诱导因子(AIF)在骨肉瘤的组织中高表达,但表达无明显相关性。
结论
波形蛋白(VIM)与骨肉瘤的转移相关,是评价骨肉瘤转移的重要指标;凋亡诱导因子(AIF)在骨肉瘤的组织中高表达,但表达无明显相关性。