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目的:针刺镇痛被广泛应用于临床,其针刺镇痛疗效确切但其机制尚未完全阐明。为了进一步阐明其镇痛机制,本研究以完全弗氏佐剂（Complete Freund’s adjuvant,CFA）诱导的关节炎炎性痛大鼠模型为研究对象,观察针刺双侧足三里穴对疼痛相关脑区腺苷受体（Adenosine receptor,ADOR）、纹状体尾壳核脑区环磷酸腺苷（Cyclic adenosine monophosphate,cAMP）-蛋白激酶A（Protein kinase A,PKA）-环磷酸腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein,CREB）信号通路及纹状体尾壳核脑区腺苷A1受体（Adenosine A1 receptor,ADORA1）能神经元兴奋性的影响,探索针刺调控中枢ADORA1信号通路的作用及部分分子机制,为针刺镇痛提供科学依据。方法:实验一针刺对CFA大鼠疼痛相关脑区腺苷受体表达的影响研究。本部分实验,将筛选出SPF级雄性Wistar大鼠随机分为:盐水组（Saline组）、模型组（CFA组）、针刺组（CFA+MA组）。盐水组给予右侧足底皮内注射生理盐水（0.1ml）;模型组与针刺组均给予右侧足底皮内注射完全弗氏佐剂（0.1ml,1mg/ml）制作CFA模型大鼠。针刺组在造模后第一天开始手针针刺大鼠双侧足三里穴,采用捻转手法,频率为180次/min,捻转行针2min,留针间隔5min,一共行会4次,共计30min,针刺干预1次/日,共7天。主要的观察效应指标为各组大鼠右侧足底热辐射痛阈值;在第7天热辐射痛阈值测量后取大鼠脑组织核团,包括尾壳核（caudate putamen,CPu）、下丘脑弓状核（arcuate nucleus,Arc）、腹侧被盖区（ventral tegmental area,VTA）、中脑导水管周围灰质（periaqueductal gray,PAG）、延髓头端腹内侧区（rostral ventromedial medulla,RVM）,通过采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative Real-time PCR,q-PCR）方法检测各组各核团ADORA1、腺苷A2a受体（Adenosine A2a receptor,ADORA2a）、腺苷A2b受体（Adenosine A2b receptor,ADORA2b）、腺苷A3受体（Adenosine A3 receptor,ADORA3）mRNA表达量的变化;采用蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测各组各核团ADORA1蛋白含量的变化及CPu脑区ADORA2a、ADORA2b、ADORA3蛋白含量的变化;再进一步采用免疫荧光染色法检测针刺对CPu脑区ADORA1表达的影响。实验二 针刺对CFA大鼠纹状体尾壳核脑区cAMP-PKA-CREB信号通路的影响研究。本部分实验,通过对盐水组、模型组、针刺组大鼠脑组织样本,采用酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）方法检测CPu脑区cAMP蛋白含量及活性的变化;采用Western blot方法检测CPu脑区PKA、CREB蛋白含量及PKA、CREB蛋白磷酸化的变化;采用多重免疫荧光染色技术共染ADORA1与p-CREB,观察各组CPu脑区ADORA1与p-CREB共表达的变化。实验三 针刺对CFA大鼠纹状体尾壳核脑区ADORA1能神经元兴奋性的影响研究。本部分实验,为了探讨CPu脑区ADORA1是否表达在神经元上,通过采用多重免疫荧光染色技术,以NeuN作为神经元细胞的标记物,共染NeuN与ADORA1,观察各组CPu脑区NeuN与ADORA1共表达;再进一步通过采用多重免疫荧光染色技术,以c-fos作为神经元兴奋性的标记物,共染c-fos与ADORA1,观察各组CPu脑区ADORA1能神经元兴奋性的变化。结果:实验一 针刺双侧足三里穴可上调CFA大鼠CPu脑区ADORA1基因和蛋白含量。本实验复制针刺镇痛效应平台:在造模前各组大鼠右侧足底基础热痛阈值无明显变化,造模后的大鼠热痛阈值均显著降低,与盐水组比较,具有显著统计学差异,表明造模成功。针刺组大鼠在针刺后,热痛阈值与模型组比较显著升高,且从第1天到第7天均具有统计学差异,说明针刺双侧足三里穴具有镇痛效应。q-PCR检测结果显示:CPu脑区,模型组大鼠ADORA1 mRNA值较盐水组升高,且有统计学差异;针刺后,ADORA1 mRNA含量进一步升高,与模型组相比有升高趋势,但无统计学差异,与盐水组相比显著升高且具有显著差异。PAG脑区,模型组大鼠ADORA1 mRNA含量较盐水组升高,且有统计学差异;与模型组相比,针刺后ADORA1 mRNA含量显著减少,具有显著差异。RVM脑区,与盐水组相比,模型组大鼠ADORA1 mRNA含量有升高趋势,但无统计学差异,针刺后大鼠ADORA1 mRNA含量进一步升高,且具有统计学差异;与模型组相比,针刺组大鼠ADORA1 mRNA含量稍有升高趋势,无统计学差异。盐水组、模型组及针刺组大鼠五个疼痛相关脑区ADORA2a mRNA、ADORA2b mRNA含量总体上均未见明显差异。CPu脑区,与盐水组相比,模型组大鼠ADORA3mRNA含量有升高趋势,无统计学差异,针刺后大鼠ADORA3 mRNA含量进一步升高,且具有显著差异;与模型组相比,针刺组大鼠ADORA3 mRNA含量有升高趋势,但无统计学差异。VTA脑区,与盐水组相比,模型组大鼠ADORA3 mRNA含量未见明显变化,针刺后ADORA3mRNA含量升高,且具有显著差异;与模型组相比,针刺组ADORA3mRNA含量升高,具有统计学差异。WB检测结果显示:CPu脑区,与盐水组相比,模型组大鼠ADORA1/Tubulin值无明显变化,针刺组ADORA1/Tubulin值升高,且具有统计学差异;与模型组相比,针刺后ADORA1/Tubulin值升高,且具有统计学差异;其他四个疼痛脑区针刺后ADORA1/Tubulin值均未见明显变化。进一步采用WB检测各组CPu脑区ADORA2a、ADORA2b、ADORA3蛋白含量的结果显示:针刺后CPu脑区ADORA2a/Tubulin、ADORA2b/Tubulin、ADORA3/Tubulin值均未见明显差异。此后,采用免疫荧光染色进一步检测针刺后CPu脑区ADORA1表达情况,结果显示:与盐水组相比,模型组和针刺组CPu脑区ADORA1表达均有升高,模型组具有统计学差异,针刺组具有显著差异;与模型组相比,针刺后ADORA1表达有明显升高,具有显著差异。实验二 针刺双侧足三里穴可下调CPu脑区CREB磷酸化水平及ADORA1和p-CREB共表达。ELISA结果显示:CPu脑区,模型组cAMP蛋白含量较盐水组有下降趋势,但无统计学差异,针刺组进一步下降,与盐水组对比具有统计学差异;与模型组相比,针刺组有下降趋势,但无统计学差异。CPu脑区,与盐水组相比,模型组和针刺组cAMP蛋白活性均下降,且模型组与盐水组比具有统计学差异、针刺组与盐水组比具有显著差异;与模型组相比,针刺组有下降趋势,但无统计学差异。Western blot结果显示:盐水组、模型组及针刺组大鼠CPu脑区p-PKA/Tubulin、PKA/Tubulin、p-PKA/PKA值总体无明显差异。CPu脑区,与盐水组相比,模型组和针刺组大鼠p-CREB/Tubulin值均降低,且均具有统计学差异;与模型组相比,针刺后p-CREB/Tubulin值无明显差异。CPu脑区,与盐水组相比,模型组和针刺组大鼠CREB/Tubulin值均降低,且均具有统计学差异;与模型组相比,针刺后CREB/Tubulin值无明显差异。CPu脑区,模型组与针刺组大鼠p-CREB/CREB值较盐水组均有下降的趋势,但盐水组、模型组与针刺组之间总体上无明显差异。采用多重免疫荧光染色技术对ADORA1（标记为红色荧光）与p-CREB（标记为绿色荧光）共染,发现ADORA1与p-CREB共定位,进一步对各组大鼠CPu脑区p-CREB表达,和ADORA1与p-CREB共表达进行半定量分析:CPu脑区,与盐水组相比,模型组p-CREB表达有显著下降,且具有显著统计学差异,针刺组进一步下降且也具有显著统计学差异;与模型组相比,针刺后有显著下降,具有显著统计学差异。CPu脑区,与盐水组相比,模型组ADORA1与p-CREB共表达有显著下降,且具有显著统计学差异,针刺组进一步下降且也具有显著统计学差异;与模型组相比,针刺后有显著下降,具有显著统计学差异。实验三 针刺双侧足三里穴可上调CPu脑区神经元上ADORA1的表达,并可抑制ADORA1能神经元兴奋性。采用多重免疫荧光染色检测大鼠CPu脑区ADORA1与NeuN共表达情况,并对其数据进行半定量分析:CPu脑区,与盐水组比较,模型组ADORA1与NeuN共表达有上升的趋势,但无统计学差异,针刺后进一步升高且具有统计学差异;与模型组相比,针刺组升高,且具有统计学差异。进一步采用多重免疫荧光染色检测各组大鼠CPu脑区ADORA1与c-fos共染,并对其数据进行半定量分析:CPu脑区,与盐水组比较,模型组和针刺组ADORA1与c-fos共表达均明显下降,模型组显著下降且具有显著统计学差异,针刺组进一步下降且具有显著差异;与模型组相比,针刺组显著下降且具有显著统计学差异。结论:1.针刺双侧足三里穴对CFA大鼠具有镇痛作用;2.针刺改善CFA大鼠炎性痛可能与针刺上调CPu脑区ADORA1表达,进而抑制cAMP-PKA-CREB信号通路有关;3.针刺可能通过抑制CPu脑区ADORA1能神经元兴奋性从而发挥镇痛效应,但其针刺镇痛机制仍需进一步验证。