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[目的]人停滞缺陷蛋白1(human arrest defective 1,hARD1)是酵母N-乙酷基转移酶ARD1的人类同源基因,它与NATI基因结合,生成NatA复合体,催化细胞内多种蛋白质乙酰化。大肠癌的发生发展与hARDI基因表达及细胞凋亡密切相关,但hARD1基因表达能否通过影响细胞凋亡途径进而影响大肠癌的发生发展及具体分子机制尚不明确。本实验以人大肠癌SW620细胞为研究对象,研究hARD1与细胞凋亡途径相关因子之间的关系,探讨hARD1基因被沉默后对凋亡信号通路蛋白的影响,进而揭示hARD1基因调控大肠癌细胞凋亡具体的分子机制,以期为大肠癌的早期诊断及治疗提供理论依据。[方法]1.人大肠癌SW620细胞株的复苏、培养、传代、冻存;2.实验组即hARD1沉默组,用ARD1 siRNA通过Lipofectamin2000转染试剂转染细胞株;阴性对照组即hARD1沉默阴性对照组,用NCsiRNA转染细胞株;空白对照组细胞株常规培养,不予特殊处理;3. RT-PCR检测各组细胞中hARDl的沉默效率;4.流式细胞术+PI染色检测各组大肠癌细胞的周期变化情况;5.流式细胞术和AnnexinV+PI染色检测各组大肠癌细胞的凋亡状况;6.用EdU法检测各组大肠癌细胞的增殖状况;7.荧光探针法检测各组大肠癌细胞中ROS含量;8.荧光定量PCR检测各组大肠癌细胞中细胞凋亡途径相关因子(TNF-α、Fas、caspase8、Apaf-1、caspase9; Bcl-2、Bad)的mRNA表达水平;9. Western blot检测各组大肠癌细胞中细胞凋亡途径相关因子(TNF-α、Fas、caspase8、Apaf-1、caspase9; Bcl-2、Bad)的蛋白质表达水平;[结果]1. ARD1siRNA和NCsiRNA转染人大肠癌SW620细胞后,用RT-PCR检测各组中hARD1的沉默效率:阴性对照组沉默效率为0%,实验组的沉默效率为62%;2.流式细胞术和AnnexinV+PI染色检测各组大肠癌细胞的周期及凋亡情况,结果显示:沉默人大肠癌SW620细胞hARDI基因后,三组细胞的细胞周期无明显改变;实验组细胞凋亡水平明显增加,而阴性对照组和空白对照组无明显差异;3. EdU检测细胞增殖提示:实验组与空白对照组及阴性对照组比较,实验组细胞增殖比例明显降低,阴性对照组与空白对照组比较细胞增殖比例无明显差异;4.荧光探针法检测ROS含量提示:实验组与空白对照组及阴性对照组比较,实验组ROS含量明显升高,阴性对照组与空白对照组比较ROS含量无明显差异;5.荧光定量PCR检测各凋亡因子mRNA表达水平结果提示:实验组的细胞凋亡途径相关因子(caspase9)的mRNA表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组,而三组中细胞凋亡途径相关因子(TNF-α、caspase8、Fas、Apaf-1、Bcl-2、Bad)的mRNA表达水平无明显改变;6. Western blot检测各凋亡因子蛋白质表达水平结果提示:实验组的细胞凋亡途径相关因子(caspase8、caspase9、Fas、Apaf-1、Bcl-2)的蛋白质表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组,而三组中细胞凋亡途径相关因子(TNF-α、Bad)的蛋白质表达水平无明显改变。[结论]1.沉默人大肠癌SW620细胞中hARD1基因后,对其细胞周期无明显影响,但能明显促进细胞凋亡和抑制细胞增殖;2.本实验证实,沉默人大肠癌SW620细胞中hARD1基因后,能够通过调节细胞凋亡途径中某些因子的转录水平和翻译水平进而促进细胞凋亡;3. hARD1基因可能作为大肠癌发生发展的潜在作用靶点,为敲除hARD1基因治疗大肠癌提供理论依据。