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目的 第一部分探讨胆囊癌的危险因素并建立用于早期诊断的列线图。对于雌激素和Hpylori两个潜在危险因素,第二部分研究将两者作用于胆道上皮细胞HIBEC后对其增殖、凋亡、迁移能力以及氧化性DNA损伤的影响。第三部分探讨两者对氧化应激相关通路Nrf2/ARE以及凋亡通路的影响。方法 第一部分回顾性研究I-II期胆囊癌患者的临床资料进行单因素和Logistic回归分析,在此基础上建立列线图。其预测准确性分别经内验证以及外验证,并做出校正曲线。第二部分中,将17β-雌二醇(10-9mol/L)以及Hpylori(MOI=1:1)作用于HIBEC细胞并反复传代至15代后,进行:(1)CCK-8、免疫细胞化学检测Ki-67的表达水平以及平板克隆实验探究细胞增殖能力;(2)Annexin-V/PI检测凋亡水平;(3)Transwell检测迁移能力;(4)流式细胞术检测ROS的表达水平,荧光染色观察8-OHdG的表达,评价氧化性DNA损伤情况。第三部分中,(1)PCR 以及 Western-blot 检测 Nrf2、Keap-1、NQO-1、HO-1 的转录和翻译水平;(2)免疫荧光双染以及Western-blot检测细胞核与胞浆中Nrf2蛋白的表达水平,探究Nrf2是否转位入核;(3)Co-IP检测Nrf2与Keap-1的相互作用;(4)EMSA检测Nrf2是否与NQO-1的DNA结合;(5)Western-blot检测凋亡通路中关键蛋白酶的表达水平。结果 第一部分中,纳入构建列线图的相关因素包括年龄、危险饮酒、确诊的胆石症病程、影像学诊断提示胆囊萎缩、胆囊壁钙化、息肉样增生、胆囊壁厚窄比和粘膜线中断。内、外验证均得到较高的一致性指数C-index(0.889和0.856)。第二及第三部分中发现:Hpylori以及17β-雌二醇可单独或协同促进HIBEC细胞:OD450值、Ki-67表达水平以及克隆形成率均显著升高(p<0.05),凋亡率降低(p=0.011以及0.005),穿膜细胞数显著增加(p=0.010以及0.000);ROS以及 8-OHdG 的表达(p=0.000);促进 HIBEC 细胞 Nrf2、Keap-1、NQO-1、HO-1的转录和翻译(p<0.05)、细胞核内Nr￡2表达水平增强(p<0.01)、促进Nr￡2与Keap-1 解离(p=0.000)、Nrf2 与 NQO-1 DNA 结合(p=0.000)以及抑制凋亡通路中关键蛋白酶的表达(p=0.000)。结论 本研究根据胆囊癌发生的危险因素,建立了 I-II期胆囊早期诊断的列线图模型。Hpylori以及雌激素可单独或协同促进HIBEC细胞发生氧化应激和DNA损伤、促进增殖并抑制凋亡。