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登革病毒是一类有包膜的单股正链RNA病毒，基因组全长约11Kb，两端为非编码区，在其5′末端含有一Ⅰ型帽子结构，3′末端无多聚A(PolyA)尾，其编码区为单一的开放读码框(ORF)，编码3种结构蛋白(C、PrM、E)和7种非结构蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b、NS5)。其中衣壳蛋白C位于病毒颗粒内部，与基因组RNA共同构成病毒核衣壳(NC)，在病毒RNA衣壳化和病毒颗粒组装过程中起重要作用。 随着感染性克隆技术的发展，以反向遗传系统为基础的新型减毒疫苗成为登革疫苗研究的热点。登革病毒减毒突变的靶标曾主要集中在基因组两端的非编码区及PrM-E区。其衣壳蛋白C一般认为是不可或缺的，但黄病毒的另一成员蜱传脑炎病毒(TBE)缺失衣壳蛋白内部疏水序列后，仍保持了增殖特性，且所获得的缺失突变病毒在毒力降低的同时免疫原性却得以保持。表明其衣壳蛋白具有一定的功能灵活性。黄病毒家族衣壳蛋白在结构上具有保守性，所有成员的衣壳蛋白均存在内部疏水序列。在病毒颗粒组装过程中，衣壳蛋白可通过此序列形成的疏水裂隙(hydrophobic cleft)与膜蛋白相结合。这样，在黄病毒衣壳蛋白内部疏水序列缺失后，可能获得生物学性质改变的突变病毒。本研究在登革病毒反向遗传系统的基础上构建衣壳蛋白缺失突变体，并对衣壳蛋白缺失突变对登革病毒生物学性质的影响加以研究，为深入探讨登革病毒基因组结构与功能的关系及研制新型登革减毒疫苗奠定基础。 为构建登革2型病毒中国分离株DEN2-43株的反向遗传系统，根据已由我室测定的DEN2-43病毒全基因组序列，利用长链RT-PCR及融合PCR法扩增此病毒长约11Kb的基因组全长cDNA分子，将其克隆至低拷贝载体pWSK29，经鉴定，获得了4株序列正确的全长克隆，其5′末端均含有外加的可进行体外转录的T7 RNA聚合酶启动子核心序列。其中，全长克隆pD212的转录体RNA具有感染性，所获得的恢复病毒的细胞培养特性和乳鼠神经毒力与原毒株类似，并可在培养细胞和乳鼠脑中稳定传代。