人溶菌酶(human lysozyme，hLYZ)能水解细菌细胞壁粘多糖的β-1，4糖苷键，所以对革兰阳性细菌具有直接的溶解作用，在分泌型免疫球蛋白A和补体的参与下对革兰氏阴性细菌具有间接的溶解作用，此外它还具有消炎、消肿、组织修复、改善组织局部血液循环和分解脓液等药理作用。因此在医学、食品工业等领域得到十分广泛的应用。 为了防治奶牛乳房炎，提高奶牛的抗病能力，试图通过转基因动物的方法提高人溶菌酶在奶牛乳腺细胞中表达，以降低乳房炎的发病率。本研究在克隆出牛β-乳球蛋白基因5’调控序列的基础上，结合本实验室已克隆出人溶菌酶cDNA序列，构建人溶菌酶基因的乳腺特异表达载体pBEL，并通过电穿孔的方法研究其在体外培养的牛乳腺上皮细胞表达情况。通过G418筛选阳性细胞，为本实验室利用核移植技术生产转基因动物提供细胞来源。研究结果如下： 1.利用PCR方法扩增了牛β-乳球蛋白基因5调控成分，其中包括部分上游序列，第一外显子及第一内含子(933bp)。PCR产物回收纯化后，克隆在pMDl8-T Vector的T位点。序列分析结果表明：该序列与牛β-乳球蛋白突变体B前体基因、牛β-乳球蛋白基因突变体B、牛β-乳球蛋白基因的同源性分别为99％、99％、98％。软件分析表明：该序列包括一些表达所需的调控成分，可用于构建乳腺表达载体。 2.利用双酶切定向克隆的方法，将真核表达载体pEGFP-Cl构建成含有抗性基因、报告基因、人溶菌酶基因eDNA的真核表达载体pEGFP-hLYZ。用PCR和双酶切方法检测，表明插入的人溶菌酶基因位点正确无误，没有发生影响表达的突变。 3.利用双酶切定向克隆的方法，将扩增的牛β-乳球蛋白基因的5调控序列序列取代真核表达载体pEGFP-hLYZ的部分CMV作为启动子，构建人溶菌酶乳腺特异性表达载体pBEL，载体有抗性基因，绿色荧光蛋白报告基因。并且保证报告基因和目的基因为非融合型表达。 4.采用电穿孔转化法转化牛乳腺上皮细胞，经过G418的初步筛选后，通过荧光显微镜观察到了绿色荧光。表明该载体是可用的。