论文部分内容阅读
背景邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯[(di-(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP)作为增塑剂被广泛用于高分子材料中,比如聚氯乙烯(Polyvinyl chloride polymer, PVC),可以增加材料的柔韧性。DEHP是公认的一种环境内分泌干扰物,具有生殖毒性和雌激素效应,具有致癌、致畸、致突变的“三致”效应。吐温80(Polysorbate80,聚山梨醇酯80)是一种非离子型表面活性剂,可用作乳化剂和润滑剂等广泛应用于食品中,并且在药剂学研究中可以通过抑制P-gp增加药物的生物利用度。目的本课题的目的是验证吐温80增加大鼠中DEHP的生物利用度的假说,并阐明其中可能机制。方法1.建立大鼠血浆中DEHP和其主要代谢产物MEHP简单、快速及高效的液相色谱(HPLC)检测方法。2.检测在大鼠体内吐温80对DEHP的生物利用度的影响。3.选用Caco-2细胞模型模拟肠道环境进行吐温80促进吸收的机理研究。以JC-1荧光探针研究吐温80对Caco-2细胞线粒体膜电位的影响；运用XF98线粒体功能检测系统研究吐温80对细胞线粒体能量产生和线粒体呼吸链的影响,进而探讨对能量依赖的P-gp外排泵的作用。结果1.在同一色谱条件下,图谱中DEHP. MEHP.内标DNHP及血浆中内源性物质均分离完全,峰形正常。DEHP和MEHP的保留时间分别约为20min和3.4min。内标物DNHP的保留时间为24min,其它杂峰为内源性物质。在所建立的HPLC条件下,血浆中内源性物质不干扰DEHP、MEHP和内标物DNHP的测定,为本课题之后毒代动力学研究打下基础。2.毒代动力学结果表明联合染毒,吐温80可明显增强DEHP的肠道吸收及生物利用度。3.吐温80通过时间及浓度依赖性降低线粒体膜电位、耗竭胞内ATP、降低电子传递链活性对Caco-2细胞线粒体功能产生影响。进而使能量依赖的P-gp的外排作用减少,增加邻苯二甲酸酯的吸收。结论吐温80能显著增加大鼠DEHP的吸收,提高其体内DEHP及MEHP的生物利用度。其机理可能由于吐温80对小肠上皮细胞中线粒体功能造成损伤、抑制了细胞中能量依赖性的P-gp的外排作用有关。