背景:内皮一氧化氮合酶（eNOS）脱偶联后产生超氧阴离子（O2.-）而非一氧化氮（NO）。我们前期研究报道了自噬诱导剂和细胞增殖抑制剂雷帕霉素能够抑制低剪切力（LSS）诱导的O2.-产生。然而,目前还不清楚自噬是否在调节eNOS脱偶联中起关键作用。目的:本研究旨在探讨自噬在LSS导致eNOS脱偶联中发挥的调节作用。方法:本实验选用人脐静脉内皮细胞作为细胞研究对象,体外实验我们用平行板流动腔调节切应力大小,体内实验我们结扎小鼠颈动脉,在颈动脉的结扎段形成低剪切力。我们应用化学发光的方法检测eNOS脱偶联介导的超氧阴离子和一氧化氮（NO）量的变化。并使用自噬激动剂、自噬抑制剂以及转染Atg5慢病毒过表达的方法降低或者升高蛋白活性和表达水平,通过激光共聚焦、流式细胞仪以及免疫印迹等实验手段来验证LSS作用下自噬与eNOS脱偶联的关系。结果:与对照组相比,LSS作用的人脐静脉内皮细胞O2.-显著增加,而NO释放减少。通过L-NAME抑制eNOS活性,可以显著减弱LSS诱导的O2.-释放。与对照组相比,LSS作用后,自噬标记蛋白如LC3 II/I比率,Beclin1以及ULK1/Atg1的表达水平增加,而p62/SQSTM1的自噬降解显著降低。同时,应用雷帕霉素或WYE-354处理后,与LSS处理组相比,能够逆转LSS引起的NO降低,但应用N-乙酰半胱氨酸或罗布麻宁不能缓解LSS引起的NO降低。与对照组相比,LSS或PMA刺激能引起的eNOS Thr495的磷酸化水平升高,通过雷帕霉素以及Atg5慢病毒过表达后,自噬水平升高,eNOS Thr495的磷酸化水平有所降低,NO水平有所缓解。与LSS组相比,应用雷帕霉素后,eNOS Ser1177磷酸化水平增加。与对照组相比,LSS作用下eNOS乙酰化水平没有明显变化,与LSS组相比,加入自噬抑制剂3-MA,Baf A1,CQ后也没有改变eNOS的乙酰化水平。结论:LSS能够通过损伤自噬流诱导eNOS Thr495磷酸化进而介导eNOS脱偶联。