论文部分内容阅读
目的：研究当归芍药散对“血不利则为水”之经典病症——肝硬化腹水的药理作用及作用机制。以大鼠肝硬化腹水模型为研究对象，分别从水代谢、肝肾功能、肝纤维化指标、肝脏病理形态及电解质代谢角度来评价当归芍药散全方及其拆方对肝硬化腹水大鼠的干预作用。通过全方与拆方比较，分别考察活血药（当归、芍药、川芎）、利水药（茯苓、白术、泽泻）对肝硬化腹水大鼠模型作用，从而阐明全方的配伍的科学性。从精氨酸加压素（AVP）及水通道蛋白（AQP）途径探讨当归芍药散对肝硬化腹水的作用机制，以期为当归芍药散治疗肝硬化腹水提供实验依据。方法：①采用苯巴比妥联合CCl4法建立肝硬化腹水大鼠模型。②代谢笼收集大鼠24h尿液，测定24h尿量；滤纸吸收法测定腹腔积液量。③全自动生化仪检测：血清肝功能指标ALT、AST、D-BIL、ALB，血清肾功能指标BUN、Cr；全自动血液凝固分析仪检测血浆PT。④放射免疫法测定肝纤维化指标HA、LN、PCⅢ、CⅣ。⑤肝组织HE染色，观察组织病理形态变化。⑥全自动生化仪检测：血清K+、Na+、Cl-浓度，尿K+、Na+、Cl-。⑦酶联免疫检测法（ELISA）测定，大鼠血浆AVP、AngⅡ、ET-1水平。⑧冰点法测定尿渗透压；酶联免疫检测法（ELISA）测定尿AQP2。⑨免疫组织化学法测定肝脏AQP4、肾脏（AVP）V2R及AQP2表达。⑩RT-PCR法、Western Blotting法测定肾组织（AVP）V2R及AQP2的表达。结果：①大鼠经苯巴比妥溶液诱导1周后，连续腹腔注射CCl4油溶液13周，可复制稳定的肝硬化腹水模型。②当归芍药散各剂量组及拆方组大鼠24h尿量明显增多，腹腔积液显著减少。③药物组血清ALT、AST、D-BIL明显降低，血清ALB明显升高，血浆PT明显缩短；血清肾功能指标BUN、Cr水平显著降低。④各药物组血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ浓度呈现不同程度降低。⑤药物组大鼠肝脏纤维间隔及变性程度较模型组有明显改善。⑥药物组肝硬化腹水大鼠电解质K+、Na+、Cl-水平升高。⑦药物组大鼠血浆AVP、AngⅡ、ET-1水平较模型组显著降低。⑧药物组大鼠尿渗透压呈降低趋势，尿AQP2浓度明显升高。⑨免疫组化结果显示，药物组肝脏AQP4积分光密度较模型组明显增强；肾组织V2R、AQP2积分光密度明显降低。⑩药物组肾组织V2R-mRNA及AQP2-mRNA表达较模型组有不同程度降低，V2R及AQP2蛋白表达灰度值亦呈现降低趋势。结论：苯巴比妥联合CCl4可复制稳定的肝硬化腹水大鼠模型。当归芍药散可明显改善肝硬化腹水大鼠肝、肾功能；延缓纤维化及肝硬化病理进程；增加尿量，促进腹水排泄；同时对伴随的电解质紊乱有较好的纠正作用。其作用机制可能与精氨酸加压素系统对水通道蛋白的调控有关。