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随着人们生活水平的提高,消费者对猪肉品质的要求越来越高。而肌内脂肪(IMF)可以显著改善色泽、风味、嫩度和持水力等指标,因此,常被作为影响肉品质的重要指标来研究。近年来,为了培育出IMF含量高的品种,育种人员主要从分子水平和常规育种两方面进行了研究。常规育种工作建立在后裔测定的基础上,而要得到准确的结果,必须进行屠宰测定,这给试验带来了较高的成本和较大的操作困难。现在,随着实时超声波技术的发展,为传统的猪肉质选育工作提供了一种新的方法。实时超声波技术允许在猪活体上进行无损测定,通过相关软件的应用可以较准确地计算出背最长肌的IMF含量。在分子育种方面,对影响猪IMF的相关候选基因的研究一直在进行,国内外均有很多报道,但真正在育种实践中得到广泛应用的不多,目前仍处于研究阶段,是猪育种研究工作的热点之一。本研究利用常规育种方法对皮杜×长大和皮杜×长蓝两个杂交配套商品猪进行肉质性状和胴体性状的测定及比较研究,同时利用实时超声波技术建立了活体测定IMF的方法;另外,研究还选择了H-FABP、RETN、PGC1、HSL、CAST、Leptin、LPL、DGAT2等9个与肉质相关的候选基因,用PCR-RFLP技术对两个杂交配套商品猪进行了多态性检测和标记-性状关联分析,特别对DGAT2基因进行了较深入的研究,通过PCR和直接测序法进行SNP筛选、对6个中外猪种和两个杂交配套商品猪进行多态性检测、标记-性状关联分析。研究还选择可能对IMF有影响的H-FABP、RETN、CA,ST和DGAT2四个基因进行了不同配套商品猪中mRNA表达量的差异研究。目的是从多角度探讨影响四元杂交商品猪IMF的主要因素,为进一步从事优质猪肉生产提供理论参考。主要结果如下:
1.利用Aloka SSD500V仪器和BioSoft Toolbox for Swine软件进行的活体IMF测定值与屠宰测定值间存在强相关,相关系数达到0.6以上。
2.通过屠宰和活体测定值的比较,皮杜长蓝的IMF、大理石纹、pH1、滴水损失、背膘厚等性状显著或极显著优于皮杜长大(P<0.05或P<0.01);皮杜长蓝的活体IMF、活体背膘厚显著高于皮杜长大(P<0.05),而屠体重和日增重显著低于皮杜长大(P<0.05)。
3.对相关候选基因SNP筛查和基因频率研究,结果在DGAT2基因上共检测到20个变异位点,其中17个转换,2个颠换,另有1个17bp的插入/缺失突变。除H-FABP基因HaeⅢ位点、PGC1基因AluⅠ位点、MC4R基因TaqⅠ位点、LPL基因PvuⅡ、Leptin基因HinfⅠ位点外,其它基因位点均存在不同程度的Hardy-Weinberg平衡偏离。
4.标记-性状关联分析结果表明,RETN、H-FABP、MC4R基因的多态位点对IMF有显著或极显著影响,其它基因位点均不影响IMF含量。RETN基因BtgⅠ酶切位点与皮杜长大的pH1、IMF显著相关;H-FABP基因HinfⅠ酶切位点与IMF、pH1、滴水损失、肉色a、b等显著或极显著相关,HaeⅢ酶切位点多态性与pH1、pH24、肉色评分、肉色L、大理石纹和滴水损失显等显著或极显著相关,MspⅠ酶切位点多态性与皮杜长大猪的肉色b显著相关;MC4R基因的TaqⅠ酶切位点与IMF含量、肉色b存在显著或极显著相关;HSL基因的BsaHⅠ酶切位点显著或极显著影响皮杜长大猪的肉色L、肉色评分;LPL基因SmaⅠ酶切位点显著影响皮杜长大猪的肉色评分;Leptin基因的HinfⅠ酶切位点极显著影响皮杜长蓝猪的滴水损失;CAST基因MspⅠ酶切位点多态性与皮杜长大猪的pH1和滴水损失显著相关,HinfⅠ酶切位点显著或极显著影响皮杜长大的肉色a、剪切力和肉色评分;DGAT2基因TspRⅠ酶切位点多态性与皮杜长大猪的肉色a显著相关。
5.相关基因表达量分析结果表明,H-FABP基因两个品种内的脂肪和背肌均极显著高于肝脏和小肠的表达量,在皮杜长蓝的肝脏显著高于皮杜长大的肝脏的表达量。DGAT2基因在皮杜长蓝的肝脏和脂肪中的表达量极显著高于小肠和背肌的表达量,在皮杜长大的脂肪中的表达量极显著高于肝脏、小肠和背肌的表达量;品种间比较,DGAT2基因在皮杜长蓝的肝脏和背肌的表达量极显著高于皮杜长大。RETN基因在两个品种各组织间的表达差异均不显著。四个基因在背肌中的表达量差异研究表明,DGAT2基因在两个群体中表达量均是最低,在皮杜长大中RETN表达量最高,皮杜长蓝中H-FABP表达量最高。