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目的:为了弥补目前民间用于治疗急性乳腺炎具有较好疗效的芙蓉乳腺宁方剂型(搽剂)透皮吸收差,施药不便,药液易于流淌的缺陷,本课题在筛选处方组成药物(木芙蓉叶、穿心莲)最佳配比的基础上,将其制成凝胶膏剂,并对其进行初步药效学研究,为芙蓉乳腺宁凝胶膏剂治疗急性乳腺炎提供实验数据。
方法:1.以木芙蓉叶的总黄酮、芦丁、异槲皮苷含量综合评分为指标,采用正交试验优化木芙蓉叶回流提取工艺参数,单因素联合星点设计优化木芙蓉叶的大孔树脂纯化工艺。2.参照文献的方法,以穿心莲内酯含量为指标,确定穿心莲的提取纯化工艺。3.等比基线法设定木芙蓉叶与穿心莲不同配比,通过醋酸扭体试验和二甲苯致耳廓肿胀试验,筛选两者最佳配比。4.以凝胶膏剂的感官评分为指标,单因素试验确定基质种类。以凝胶膏剂感官评分、初黏力、持黏力的综合评分为指标,均匀设计优选芙蓉乳腺宁凝胶膏剂的基质配制,确定基质处方,考察其最大载药量。以穿心莲内酯24h的累计渗透量为指标,采用Franz扩散法进行芙蓉乳腺宁凝胶膏剂体外透皮试验,筛选其较佳促渗剂。5.通过钝性微量进样器对泌乳期大鼠乳头管灌注脂多糖(LPS)溶液,建立急性乳腺炎大鼠模型。乳腺组织病理切片评价芙蓉乳腺宁凝胶膏剂对急性乳腺炎大鼠的保护作用,免疫组化法测定乳腺组织髓过氧化物酶(MPO)的活性,酶联免疫吸附法(Elisa)检测乳腺组织中炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的蛋白表达水平,探讨芙蓉乳腺宁凝胶膏剂保护急性乳腺炎大鼠的作用机制。
结果:1.木芙蓉叶提取工艺:加入14倍量60%的乙醇,回流3次,每次1h。木芙蓉叶纯化工艺:取15g AB-8大孔树脂上16mL木芙蓉叶上样液(0.25g生药·mL-1,pH4.85)以1.0mL·min-1的流速上样吸附,180mL蒸馏水以2.0mL·min-1的流速去除杂质,40mL85%的乙醇以1mL·min-1的流速进行洗脱,纯化后,木芙蓉叶中总黄酮、芦丁、异槲皮苷的纯度分别为44.95%、4.07%、0.50%。2.穿心莲提取工艺:加入12倍量70%乙醇超声提取1h。穿心莲纯化工艺:取15g HPD-100大孔树脂上15mL穿心莲上样液(1g生药·mL-1)以1.0mL·min-1的流速上样吸附,100mL蒸馏水以2.0mL·min-1的流速去除杂质,100mL70%的乙醇以1mL·min-1的流速进行洗脱,纯化后,穿心莲内酯的纯度为7.87%。3.木芙蓉叶与穿心莲最佳生药配比为1∶1。4.芙蓉乳腺宁凝胶膏剂最佳基质处方为:NP700∶高岭土∶甘油∶酒石酸∶甘羟铝∶水(0.1000∶0.5000∶4.1467∶0.3982∶0.0040∶0.0400∶4.0000,w/w),空白基质载药量为10%,3%丙二醇为其较佳促渗剂,芙蓉乳腺宁凝胶膏剂透皮行为符合零级方程。5.用钝性微量进样器对泌乳期大鼠乳头管灌注LPS溶液,成功建立大鼠急性乳腺炎模型,经芙蓉乳腺宁凝胶膏剂(高剂量)干预后,与模型组相比,大鼠乳腺组织中MPO的活性明显降低,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平也显著下降。
结论:1.木芙蓉叶提取工艺稳定可行,AB-8大孔树脂对木芙蓉叶黄酮类成分有一定纯化效果。2.穿心莲提取工艺稳定可行,HPD-100大孔树脂对穿心莲内酯有一定纯化作用。3.筛选的木芙蓉叶与穿心莲1∶1有较好的镇痛、抗炎作用。4.制备的芙蓉乳腺宁凝胶膏剂外观平整、光滑、粘性较好。5.芙蓉乳腺宁凝胶膏剂对急性乳腺炎大鼠有一定的保护作用,其作用机制可能与降低乳腺组织中MPO的活性、分布及IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子的蛋白表达水平有关,芙蓉乳腺宁凝胶膏剂具有良好的开发前景。
方法:1.以木芙蓉叶的总黄酮、芦丁、异槲皮苷含量综合评分为指标,采用正交试验优化木芙蓉叶回流提取工艺参数,单因素联合星点设计优化木芙蓉叶的大孔树脂纯化工艺。2.参照文献的方法,以穿心莲内酯含量为指标,确定穿心莲的提取纯化工艺。3.等比基线法设定木芙蓉叶与穿心莲不同配比,通过醋酸扭体试验和二甲苯致耳廓肿胀试验,筛选两者最佳配比。4.以凝胶膏剂的感官评分为指标,单因素试验确定基质种类。以凝胶膏剂感官评分、初黏力、持黏力的综合评分为指标,均匀设计优选芙蓉乳腺宁凝胶膏剂的基质配制,确定基质处方,考察其最大载药量。以穿心莲内酯24h的累计渗透量为指标,采用Franz扩散法进行芙蓉乳腺宁凝胶膏剂体外透皮试验,筛选其较佳促渗剂。5.通过钝性微量进样器对泌乳期大鼠乳头管灌注脂多糖(LPS)溶液,建立急性乳腺炎大鼠模型。乳腺组织病理切片评价芙蓉乳腺宁凝胶膏剂对急性乳腺炎大鼠的保护作用,免疫组化法测定乳腺组织髓过氧化物酶(MPO)的活性,酶联免疫吸附法(Elisa)检测乳腺组织中炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的蛋白表达水平,探讨芙蓉乳腺宁凝胶膏剂保护急性乳腺炎大鼠的作用机制。
结果:1.木芙蓉叶提取工艺:加入14倍量60%的乙醇,回流3次,每次1h。木芙蓉叶纯化工艺:取15g AB-8大孔树脂上16mL木芙蓉叶上样液(0.25g生药·mL-1,pH4.85)以1.0mL·min-1的流速上样吸附,180mL蒸馏水以2.0mL·min-1的流速去除杂质,40mL85%的乙醇以1mL·min-1的流速进行洗脱,纯化后,木芙蓉叶中总黄酮、芦丁、异槲皮苷的纯度分别为44.95%、4.07%、0.50%。2.穿心莲提取工艺:加入12倍量70%乙醇超声提取1h。穿心莲纯化工艺:取15g HPD-100大孔树脂上15mL穿心莲上样液(1g生药·mL-1)以1.0mL·min-1的流速上样吸附,100mL蒸馏水以2.0mL·min-1的流速去除杂质,100mL70%的乙醇以1mL·min-1的流速进行洗脱,纯化后,穿心莲内酯的纯度为7.87%。3.木芙蓉叶与穿心莲最佳生药配比为1∶1。4.芙蓉乳腺宁凝胶膏剂最佳基质处方为:NP700∶高岭土∶甘油∶酒石酸∶甘羟铝∶水(0.1000∶0.5000∶4.1467∶0.3982∶0.0040∶0.0400∶4.0000,w/w),空白基质载药量为10%,3%丙二醇为其较佳促渗剂,芙蓉乳腺宁凝胶膏剂透皮行为符合零级方程。5.用钝性微量进样器对泌乳期大鼠乳头管灌注LPS溶液,成功建立大鼠急性乳腺炎模型,经芙蓉乳腺宁凝胶膏剂(高剂量)干预后,与模型组相比,大鼠乳腺组织中MPO的活性明显降低,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平也显著下降。
结论:1.木芙蓉叶提取工艺稳定可行,AB-8大孔树脂对木芙蓉叶黄酮类成分有一定纯化效果。2.穿心莲提取工艺稳定可行,HPD-100大孔树脂对穿心莲内酯有一定纯化作用。3.筛选的木芙蓉叶与穿心莲1∶1有较好的镇痛、抗炎作用。4.制备的芙蓉乳腺宁凝胶膏剂外观平整、光滑、粘性较好。5.芙蓉乳腺宁凝胶膏剂对急性乳腺炎大鼠有一定的保护作用,其作用机制可能与降低乳腺组织中MPO的活性、分布及IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子的蛋白表达水平有关,芙蓉乳腺宁凝胶膏剂具有良好的开发前景。