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第一部分Hyaluronic Acid-Cu(II)-Quercetin配位聚合物纳米粒子的制备及表征目的制备Hyaluronic Acid-Cu(II)-Quercetin配位聚合物纳米粒子,并进行相关表征。方法采用自组装的方法制备Hyaluronic Acid-Cu(II)-Quercetin配位聚合物纳米粒子(HA-Cu-Qu NPs),并观察其形态,检测其粒径、Zeta电位、铜离子价态及含量、纳米粒子组成、载药量以及室温下稳定性等一般特性。结果制备的Hyaluronic Acid-Cu(II)-Quercetin配位聚合物纳米粒子形态类似球形,大小均一,即粒径分布均匀,平均粒径为(78.62±1.60)nm,Zeta电位为(-7.29±0.73)m V,XPS结果显示铜离子价态为+2价和+1价,ICP-MS测得每毫升纳米粒子中含有铜离子133μg,FT-IR结果表明纳米粒子结构中有槲皮素和透明酸成分。槲皮素和铜离子总的载药量为9%。DLS结果显示HA-Cu-Qu NPs能在室温下稳定存在7天以上。结论本实验成功制备了Hyaluronic Acid-Cu(II)-Quercetin配位聚合物纳米粒子,且各项表征实验结果显示该纳米粒粒径均一,载药量高,室温稳定性好,提示其可作为体内外实验的药物研究基础。第二部分Hyaluronic Acid-Cu(II)-Quercetin配位聚合物纳米粒子对乳腺癌的体外抗肿瘤初步实验研究目的探究HA-Cu-Qu NPs在细胞内外产生ROS的能力和HA-Cu-Qu NPs的细胞摄取过程、对乳腺癌MDA-MB-231细胞的协同抑制作用以及生物相容性。方法细胞外采用亚甲蓝紫外吸收法测定HA-Cu-Qu NPs与不同浓度的过氧化氢(H2O2)反应生成羟基自由基(·OH)的能力;细胞内采用DCFH-DA染色,通过荧光显微镜定性检测HA-Cu-Qu NPs与50μM过氧化氢(模拟肿瘤微环境中过氧化氢浓度)反应生成ROS的能力;采用流式细胞术的方法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞在不同时间点对HA-Cu-Qu NPs的摄取情况;模拟肿瘤微环境中过氧化氢的浓度(50μM),采用CCK-8法分别评价不同浓度的HA-Cu-Qu NPs和HA-Cu-Qu NPs+H2O2对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制效果,并分析其协同抗肿瘤效果及量效关系;采用CCK-8法评价不同浓度的HA-Cu-Qu NPs对人正常肝细胞LO2的毒性作用以评价其生物相容性。结果在细胞外,HA-Cu-Qu NPs可以通过类芬顿反应与H2O2反应生成强氧化性的·OH,且·OH的生成量随着H2O2浓度的增加而增多,说明HA-Cu-Qu NPs具有良好的生成ROS的能力;而在模拟肿瘤微环境下,HA-Cu-Qu NPs也同样具有将H2O2转化成强氧化性的·OH的能力;随着时间的延长,HA-Cu-Qu NPs在MDA-MB-231细胞中迅速蓄积,并在0.5h左右达到最大蓄积浓度;在模拟肿瘤微环境下(+H2O2),HA-Cu-Qu NPs对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有更显著的协同抑制作用,且随着浓度的增加,抑制效果越强,具有明显的量效关系;不同浓度的HA-Cu-Qu NPs未对LO2细胞具有明显毒性,说明其具有良好的生物相容性。结论Hyaluronic Acid-Cu(II)-Quercetin配位聚合物纳米粒子无论在细胞内外均能通过类芬顿反应与过氧化氢反应高效产生ROS,为其发挥CDT提供了证据支持;而且细胞实验证实该配位聚合物纳米粒子对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有显著的协同抑制作用,此外该纳米粒也显示出良好的生物相容性,为体内实验奠定了基础。