【摘 要】
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目的 探讨在Co γ-射线单次辐射下,扇贝多肽(PCF)对小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的保护作用及机制.方法建立Co(辐射细胞的强度为3Gy)对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的病理模型.实验设计分为6组:对照组,Co模型组,Co+0.125％PCF组,Co+0.25%PCF组,Co+0.5%PCF组和Co+0.1%VitC组.MTT法检测细胞活性;透射电镜观察细胞超微结构的改变;琼脂糖凝胶电泳观察
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目的 探讨在<60>Co γ-射线单次辐射下,扇贝多肽(PCF)对小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的保护作用及机制.方法建立<60>Co(辐射细胞的强度为3Gy)对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的病理模型.实验设计分为6组:对照组,<60>Co模型组,<60>Co+0.125％PCF组,<60>Co+0.25%PCF组,<60>Co+0.5%PCF组和<60>Co+0.1%VitC组.MTT法检测细胞活性;透射电镜观察细胞超微结构的改变;琼脂糖凝胶电泳观察DNAladder;酶生化法测定胞浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量以及细胞抗超氧阴离子能力(A-SAC)和总抗氧化能力(T-AOC);流式细胞仪PI染色测定细胞凋亡率;Fluo-3-AM荧光染色测定细胞内游离[Ca<2+>]<,i> Rhodamine 123荧光染色测定线粒体膜电位(△ψ<,M>);免疫细胞化学检测细胞p53、Bcl-2、Bax基因蛋白的表达;原位杂交检测细胞P21 mRNA、P38mRNA的基因表达;结果 在强度为3Gy <60>Co辐射情况下:0.125-0.5%浓度范围内PCF能显著提高小鼠胸腺淋巴细胞的活性;抑制<60>Co辐射所致淋巴细胞早、中、晚期凋亡的形态学改变,维持细胞的正常超微结构;抑制淋巴细胞DNA梯状带的出现;降低淋巴细胞凋亡率;显著提高细胞浆中SOD、GSH-px的活性,降低ROS、MDA含量,提高A-SAC及T-AOC;降低淋巴细胞内游离[Ca<2+>]<,i>;稳定线粒体的膜电位;抑制<60>Co辐射后小鼠胸腺淋巴细胞p53基因蛋白和Bax蛋白在胞浆的表达,增强Bcl-2蛋白的表达;同时还可抑制<60>Co辐射后小鼠胸腺淋巴细胞P21 mRNA和P38 mRNA的表达.以上统计结果差异均有显著性(P<0.01,P<0.05).结论 扇贝多肽能提高体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞的活性,抑制<60>Co辐射诱导的淋巴细胞凋亡,对<60>Co辐射损伤的小鼠胸腺淋巴细胞具有保护作用.其作用机制与PCF能清除氧自由基、提高抗氧化酶活性、降低细胞内游离[Ca<2+>]<,i>、保护细胞膜相结构、减少DNA断裂有关;同时与PCF能抑制突变型p53蛋白和促凋亡蛋白Bax的表达,增强凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达以及抑制P21、P38基因mRNA的表达,影响淋巴细胞凋亡的信号转导中的基因调控有关.
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