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研究目的探讨抗癌扶正方(Recipe of Antiliver Cancer, ALC)抗肝癌、促进凋亡的作用及机制,进而阐述周仲瑛教授“癌毒”理论的分子生物学基础,从而为临床应用提供依据。研究方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,以顺铂为阳性对照,ALC水提液及ALC含药血清为实验组,ALC水提液设0.972mg/mL、1.944mg/mL、3.888mg/mL三个剂量组,采用MTT法检测ALC对人肝癌细胞SMMC-7721生长的影响,采用流式细胞仪FCM检测药物作用后的细胞凋亡及周期分布情况,并通过RT-PCR及Western Blot法检测ALC对人肝癌细胞SMMC-7721PI3K/AKT通路的凋亡相关蛋白表达的影响。研究结果MTT结果显示：ALC以浓度及时间依赖的方式抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,ALC水提液在0.972mg/mL、1.944mg/mL、3.888mg/mL浓度时作用24h、48h、72h后,其吸光度值与空白对照组相比有显著差异；10%及20%ALC含药血清的吸光度值与空白组相比无显著差异,两组血清对肝癌细胞抑制率不显著,且有组别吸光度值甚至高于空白组。人肝癌细胞SMMC-7721经ALC作用48h后发生凋亡,且凋亡率呈剂量依赖性升高。FCM流式细胞分析的峰图上,G,峰前出现的亚二倍体峰,即凋亡细胞所形成的凋亡峰Ap峰。FCM细胞周期显示,与空白对照组细胞比较,ALC作用48小时后,细胞G0/G1期比例相对增加,S期及G2/M期比例相对下降,细胞周期于G0/G1期发生阻滞。RT-PCR示ALC作用48h后AKT1及AKT2水平显著降低,caspase-9表达水平显著升高,且呈剂量依赖性。Western Blot显示ALC作用于人肝癌细胞SMMC-7721后,PTEN、caspase-9的活性增强,p-AKT的表达降低,且呈剂量依赖性。研究结论ALC能明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,诱导肝癌细胞凋亡及阻滞细胞周期于G0/G1期,且能增加人肝癌细胞SMMC-7721PTEN的表达,进而抑制PI3K/AKT信号通路的激活,继之激活下游caspase-9促凋亡分子的表达,诱导人肝癌细胞SMMC-7721发生凋亡该研究表明PI3K/AKT信号通路在ALC诱导的人肝癌细胞SMMC-7721凋亡中起了重要作用。